Остеосаркома у собак: симптомы, фото, лечение и прогноз

Распространенность и факторы риска остеосаркомы у собак

Остеосаркома (ОС) является самой распространенной первичной опухолью костей у собак, а частота встречаемости достигает 85% от всех новообразований костей [1-5]. Примерно у 10000 собак в США ежегодно диагностируют остеосаркому [6, 7]. Эпидемиология остеосаркомы у собак хорошо изучена [8-19]. Предрасположены к развитию остеосаркомы собаки среднего и старшего возраста с медианой в 7 лет. Остеосаркома может встречаться и в молодом возрасте, так она описана у 6-ти месячного щенка и есть небольшой пик заболеваемости у собак в возрасте 18-24 месяцев [13].

Первичная остеосаркома ребер встречается у собак в среднем возрасте с медианой в 4.5-5.4 лет [20, 21].

Остеосаркома встречается у собак крупных и гигантских пород. В исследовании 1462 собак с остеосаркомами, 29% собак имело массу тела более 40 кг, из них только 5% опухолей локализовалось в осевом скелете. Только 5% остеосарком было диагностировано у собак с массой тела менее 15 кг, однако 59% из этих новообразований в осевом скелете. Увеличение массы тела собаки повышает риски развития остеосаркомы [22].

К развитию остеосаркомы предрасположены породы: немецкий дог, сенбернар, ирландский сеттер, доберман пинчер, ротвейлер, немецкая овчарка и золотистый ретривер [1, 2, 4, 8, 9, 13, 17, 19, 22]. Самцы более предрасположены к остеосаркоме, так соотношение самцов к самкам собак составляет 1.1-1.5 к 1 [2, 3, 9, 12, 13, 16]. Исключением являются собаки породы сенбернар, ротвейлер и немецкий дог, а также собаки с остеосаркомой аксиального скелета (за исключением ребер и позвоночника), у которых встречаемость у самок несколько выше, чем у самцов [2, 21].

Некастрированные собаки имеют повышенные риски развития остеосаркомы [22]. Однако, ротвейлеры, которым провели кастрацию (стерилизацию) в возрасте до 1 года, имели повышенные риски развития остеосаркомы по сравнению с контрольной группой [23].

Примерно 75% остеосарком поражают кости периферического скелета [2, 21]. Чаще всего опухоль развивается в области метафиза длинных трубчатых костей, грудные конечности поражаются в два раза чаще чем тазовые. Самыми распространенными локализациями являются: дистальный эпифиз лучевой и проксимальный эпифиз плечевой кости [11]. На тазовых конечностях остеосаркома располагается в области дистального эпифиза бедренной кости, проксимального и дистального эпифиза большеберцовой кости, реже всего опухоль локализуются в области проксимального эпифиза бедренной кости [2]. Первичная остеосаркома крайне редко поражает кости ниже запястного или скакательного суставов [24].

При изучении 116 случаев аксиальной остеосаркомы в 27% случаев опухоль располагалась на нижней челюсти, в 22% — верхней челюсти, 15% — на позвоночном столбе, 14% — черепе, 10% — ребрах, 9% — носовой полости и пазухах и 6% — тазовых костях [21].

Мультицентрическая форма остеосаркомы, на момент постановки диагноза, составляет менее 10% от всех случаев [25].

Внескелетная форма остеосаркомы встречается редко, однако описаны остеосаркомы молочных желез, подкожных тканей, селезенки, кишечника, печени, почек, семенников, влагалища, глаза, связок желудка, синовиальной и менингеальной оболочки и надпочечников [26-31].

Патофизиология и биологическое поведение остеосаркомы у собак

Остеосаркома у собак это злокачественная мезенхимальная опухоль первичных клеток кости. Эти клетки продуцируют внеклеточный матрикс остеоидов, наличие опухолевого остеоида позволяет гистологу дифференцировать остеосаркому от других видов сарком кости. Гистологическая характеристика может отличаться между опухолями или даже внутри одной опухоли.

Существует несколько подклассификаций остеосарком, которые основываются на типе и количестве матрикса и характеристики клеток: остеобластная, хондробластная, фибробластная, плохо дифференцированная и телеангиэктатическая.

Определение щелочной фосфатазы при гистологическом или цитологическом исследовании позволяет дифференцировать остеосаркому от другие соединительно-тканных опухолей [101-103].

Влияние различной гистологической характеристики остеосаркомы на ее биологическое поведение у собак остается неоднозначным. В некоторых исследованиях получены данные о влиянии степени дифференцировки остеосаркомы на биологическое поведение, в других взаимосвязь не получена [104, 105].

Изучаются новые методы оценки генетических или молекулярных нарушений для определения биологического поведения остеосаркомы [106]. Степень анэуплоидии первичных и метастатических опухолей измеряют при помощи проточной цитометрии и ее можно использовать как маркер биологического поведения [75].

Остеосаркома оказывает крайне негативное локальное действие на кость, вызывая ее лизис, продукцию или их сочетание (рисунок 1). Патологический перелом у собак или людей с остеосаркомой не исключает возможность проведения органосохранной операции и не ухудшает прогноз [107-110]. Однако наличие или высокая вероятность патологического перелома, затрудняют проведение стереотаксической радиотерапии и хирургической стабилизации из-за высокой частоты инфицирования или поломки импланта [111, 112].

Метастазирование встречается очень часто у собак с остеосаркомами, как правило поражаются легкие. Менее чем у 15% собак выявляют метастазы при проведении рентгенографии на момент постановки диагноза, однако примерно 90% животных погибают от них в течение 1 года (медиана продолжительности жизни ~ 19 недель при проведении только ампутации)[2, 16].

Метастазирование происходит, как правило, гематогенно, однако лимфогенное метастазирование тоже возможно [113]. Чаще всего метастазы обнаруживают в легких, реже в других мягких тканях или костях [114]. У людей доказана большая частота костных метастазов при проведении системной химиотерапии, аналогичную ситуацию подозревают и у собак [115, 116]. Описаны случаи «прыгающих метастазов» (skip metastases) в кость [117]. Продвинутые методы диагностики, такие как магнитно-резонансная или компьютерная или позитронно-эмиссионная томография, могут помочь в диагностике таких метастазов [118, 119].

Характеристика метастазов варьируется в зависимости от локализации остеосаркомы и размеров скелета у собак. Для остеосаркомы периферического скелета, расположенной в нетипичных местах (локтевая кость), характерно менее агрессивное течение [120, 121]. Первичная остеосаркома осевого скелета (кости черепа, нижняя челюсть) вероятно тоже имеет менее агрессивный метастатический потенциал, однако локальные рецидивы или метастазы в регионарных лимфатических узлах, связаны с низкой продолжительностью жизни [122-125].

Помимо этого, метастатический потенциал может быть связан с породой, размером и, что более вероятно, генетикой мелких пород собак. Так в одном исследовании остеосаркомы у 51 собаки мелкой породы, не было получено значимой разницы в продолжительности жизни при проведении ампутации или химиотерапии с ампутацией [126]. Хотя эти выводы необходимо проверить в дополнительных исследованиях, можно предположить, что биологическое поведение и метастатический потенциал периферической остеосаркомы связан с размером скелета собаки (чем он больше, тем более агрессивное биологическое поведение).

Анамнез и клинические симптомы у собак с остеосаркомой | Признаки остеосаркомы

Собаки с остеосаркомой периферического скелета, обычно поступают на прием по поводу хромоты и отека или уплотнения в области конечности. Собаки могут поступать с острой неопорной хромотой по причине патологического перелома [127]. Однако до 60% собак имеют хромоту в течение различного времени до обращения за ветеринарной помощью [107].

У собак крупных или гигантских пород с хромотой или уплотнением в области метафизов костей, стоит подозревать остеосаркому. Патофизиология боли при остеосаркоме не до конца изучена, она может быть связана с потерей механической прочности кости, которая приводит к появлению микропереломов, инфильтрации или компрессии нервов и хемотаксисом клеток иммунной системы с выделением цитокинов и протеаз, которые приводят к воспалительной боли. Клетки остеосаркомы могут секретировать ноцицептивные лиганды потенциально приводящие к болевому синдрому [97].

Симптомы аксиальной остеосаркомы зависят от локализации опухоли. Симптомы могут варьироваться от локализованного уплотнения (рисунок 2) с или без хромоты (лопатка, тазовые кости или ребра) до дисфагии (ротовая полость), экзофтальма и боли при открытии ротовой полости (каудальная часть нижней челюсти или орбита), деформации лицевого скелета и выделений из носовых ходов (синусы, носовая полость) и гиперстезии с или без неврологического дефицита (позвоночный столб).

У собак с остеосаркомой ребер может наблюдаться болевая реакция при пальпации опухоли. Дыхательные симптомы встречаются редко, даже при значительном внутригрудном компоненте опухоли.

У собак с метастазами в легкие, первые клинические симптомы обычно неспецифичные (потеря массы тела, сниженный аппетит, вялость), нарушение дыхания наблюдаются редко. Описаны случаи развития легочной (гипертрофической) остеопатии у собак с метастазами остеосаркомы в легкие.

Симптомы (фото) остеосаркомы у собаки — **Рисунок 2**. *Фотографии конечностей собак с остеосаркомой (фото).*

Системное влияние опухоли

Изменения в энергетическом обмене, синтезе белков, распределении углеводов и потеря азота с мочой описаны у собак с остеосаркомами [128]. При этом клинических проявлений кахексии может не наблюдаться. В процессе лечения собак с остеосаркомами может наблюдаться потеря массы тела, однако она не влияет на прогноз [129]. У собак с остеосаркомами может наблюдаться снижение концентрации хрома, цинка, железа и железосвязывающей способности, а также повышенный уровень ферритина [130].

Диагностика остеосаркомы у собак | Рентген

Рентгенография

Рентгенографию проводят минимум в двух взаимно перпендикулярных проекциях (боковая и прямая). Характер костного поражения может варьироваться от преимущественно литического до остеопродуктивного или смешенного типа.

Частые находки на рентгенограммах включают в себя (рисунок 3):

Деструкция кортикального слоя кости, в ряде случаев такое литическое поражение может приводить к патологическому перелому;
Инвазия в окружающие кость мягкие ткани с ее отеком и образованием реактивной или опухолевой костной ткани;
Инвазия опухоли в кортикальный слой кости, приводит к периостальной реакции и образованию новой кости под слоем надкостницы («треугольник Кодмана»)
Для остеосаркомы не характерна инвазия в суставной хрящ (это возможно, но встречается относительно редко);
Потеря нормального трабекулярного строения метафизарного отдела кости, с литическими очагами и нечетной переходной зоной.

Данные отклонения не являются специфичными для остеосаркомы и могут встречаться при других первичных опухолях кости (хондросаркомы, фибросаркомы, гемангиосаркомы), метастатических поражениях, остеомиелите (бактериальном или грибковом) и костных кистах. Остеомиелит стоит подозревать у животных с нетипичным для опухоли анамнезом (возраст, локализация поражения, история путешествий или покусов/травм пораженной области). Для вторичных или метастатических поражений характерна локализация в области диафиза кости, наличие нескольких очагов (особенно в костях осевого скелета) и первичной опухоли (например, удаление карциномы молочной железы). Для лимфомы или множественной миеломы характерен преимущественно литический характер поражения кости.

Рентген собак с остеосаркомой — **Рисунок 3**. *(A) Характерная периостальная реакция*, нечеткая переходная зона; (B) Определяются нечетки зоны лизиса и склероза кости, периостальная реакция; (С) Участок лизиса в каудальной части метафиза плечевой кости.

Биопсия

Предварительный диагноз остеосаркомы или другой костной опухоли ставят на основании данных клинического осмотра, анамнеза, симптомов и рентгенографии.

Окончательный диагноз ставят на основании результатов цитологии и гистологии. Цитологическое исследование не всегда позволяет получить точный диагноз, однако в последних исследованиях получена достаточно высокая чувствительность метода [133, 134, 101].

При проведении биопсии стоит заранее планировать место взятия материала, так как происходит контаминации операционной раны опухолевыми клетками. Биопсию необходимо проводить таким образом, чтобы в дальнейшем можно было единым блоком удалить рубец после биопсии [135, 136].

Забор материала для гистологии можно проводить методом инцизионной или толстоигольной (трепан) биопсии (рисунок 4). Инцизионная биопсия позволяет получить большое количество ткани для исследования, однако риски осложнений (кровотечение, несостоятельность швов, инфекция, диссеминация тканей опухолью, патологический перелом) выше по сравнению с трепан-биопсией [137, 138]. Трепан-биопсия позволяет получить точный диагноз в 82,3-93,8% случаев [139, 140]. Результативность биопсии также зависит от опыта врача проводившего забор и патоморфолога.

Гистологическое заключение о реактивной костной ткани не может полностью исключить опухолевой процесс, особенно если все другие данные указывают на наличие новообразования кости. Бывают случаи, когда очень сложно отличить реактивную кость от опухолевой при помощи биопсии из-за особенности строения остеосаркомы.

Для минимизации шансов забора реактивной кости, у собак с остеосаркомами и другими опухолями кости, материал при проведении биопсии стоит брать из центральной, а не периферической части измененных тканей (рисунок 4). По данным учебной литературы, оптимальный диаметр трепана составляет 8-11G. Необходимо выбирать участок кожи, который ближе всего распологается к опухоли, также учитывать расположение важных анатомических структур (нервов, сосудов, сухожилий). Для минимизации шансов патологического перелома не рекомендуют перфорировать дальний кортикальный слой кости. Оптимально провести забор 2-4 «столбиков» такни по 1-2 см. Для опухолей расположенных в труднодоступных местах, можно использовать визуальный контроль в виде компьютерной томографии или рентгеноскопии.

Биопсия при остеосаркоме у собак — **Рисунок 4**. *Схематичное изображение проведения трепан-биопсии кости.*

После удаления опухоли (ампутация или протезирование), ее необходимо повторно отправить для гистологического исследования и сравнения с результатами предоперационной биопсии. В ряде случаев, когда клинические и визуальные данные свидетельствуют о первичной опухоли кости, а вероятность инфекционного процесса мала, можно рассмотреть вариант проведения удаления опухоли без предварительной биопсии (особенно если есть патологический перелом, нерезультативная биопсия, длительные сроки получения заключения).

Определение стадии заболевания у собак с остеосаркомой

У собак с остеосаркомой важно определить стадию распространения болезни. Лимфогенное метастазирование остеосарком встречается редко, однако во всех случаях необходимо проводить оценку регионарных лимфатических узлов и проводить тонкоигольную биопсию, если они увеличены [113]. Костные метастазы можно заподозрить по анамнезу (хромота, болевой синдром, неврологические нарушения) и результатам ортопедического осмотра, далее при необходимости провести рентгенографию или томографию пораженной зоны.

Самым частым местом локализации метастазов у собак с остеосаркомой являются легкие. Обычно на момент диагностики легочные метастазы не проявляются клинически и их сложно определить методом аускультации. Обязательным этапом обследования является проведение рентгенографии грудной клетки (рисунок 5) в двух или трех проекциях [142]. К сожалению, даже на высококачественных рентгеновских снимках, достоверно визуализировать метастазы можно когда они достигают размеров 7-9 мм.

По статистике, на момент первичного обращения, метастазы в легких на рентгенограммах отмечаются примерно в 10% случаев. Более продвинутые методы диагностики, такие как компьютерная томография, обладают большей чувствительностью по сравнению с рентгенографией и могут помочь выявить более мелкие очаги, невидимые на рентгеновских снимках [143-147, 118, 119].

Ультразвуковое исследование органов брюшной полости проводят для исключения наличия абдоминальных метастазов остеосаркомы. Частота метастазирования остеосаркомы в органы брюшной полости составляет 0-2.5%, описаны метастазы в почки, печени и подвздошные лимфатические узлы [153, 154].

Стадии остеосаркомы у собак

Хирургическое стадирование сарком скелета было разработано для людей [155]. Эта система основывается на степени дифференцировки опухоли (G), локальному распространению (T) и регионарному или отдаленному метастазированию (M). Существует три стадии:

I стадия — высокодифференцированная опухоль без метастазов
II стадия — низкодифференцированная опухоль без метастазов
III стадия — любая степень дифференцировки опухоли с метастазами

Стадии дополнительно подразделяют по степени локального распространения опухоли на:

А — опухоль не вышла за пределы кости
B — опухоль вышла за пределы кортикального слоя кости

Учитывая эту систему стадирования, большинство собак с остеосаркомами поступают на прием со стадией IIB.

Прогностические факторы у собак с остеосаркомой

Локализация и стадия остеосаркомы

В одном исследовании 162 собак с остеосаркомой, которым проводили только ампутацию, выживаемость у животных в возрасте <5 лет, была хуже по сравнению с более пожилыми собаками, однако в другом исследовании возраст животного не являлся прогностическим фактором [16, 159]. В других исследованиях большой размер опухоли [13, 160, 161] и локализация в плечевой кости [162, 163, 164], являлись плохим прогностическим фактором. Остеосаркома локализованная на плоских костях, маленький размер собаки и чистые границы резекции были связаны с лучшими результатами лечения и являются положительными прогностическими факторами [124, 126, 165]. Низкая степень дифференцировки опухоли и высокий митотический индекс связаны с более плохим прогнозом, однако в другом исследовании дифференцировка опухоли не влияла на прогноз [104, 105].

Для остеосарком расположенных в области головы (нижняя и верхняя челюсть, кости черепа), характерен местный агрессивный рост с более низкой тенденцией к метастазированию, по сравнению с локализацией в костях периферического скелета [120, 122, 123, 166-168]. Так в исследовании 183 собак местные рецидивы отмечались в 51.3% случаев, а метастазирование в 38.5%, а медиана продолжительности жизни составила 239 суток [124]. В другом исследовании собак с остеосаркомой нижней челюсти, которым проводили мандибулэктомию, 1-а годичная выживаемость составила 71% [122], что говорит о менее агрессивном биологическим поведении. Еще в одном исследовании собак с саркомами нижней челюсти, были получены схожие результаты, а добавление адъювантной химиотерапии к мандибулэктомии привело к значительному улучшению показателей выживаемости [125]. Локализация остеосаркомы на верхней челюсти связано с более худшими результатами лечения, так срок выживаемости по данным нескольких исследований, составил ~ 5 месяцев после проведения максиллэктомии [167, 168].

Прогноз для собак с локализацией остеосаркомы на ребрах составляет ~ 4 месяца при проведении хирургической операции и ~ 8 месяцев при проведении хирургической операции и адъювантной химиотерапии [169-172]. Прогноз для остеосаркомы расположенной на лопатке, после проведения скапулэктомии и химотерапии — благоприятный [165, 173, 174], так медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составляет 210 и 246 суток, соответственно [121]. Функция конечности после проведения после субтотальной скапулэктомии хорошая или отличная [121]. Выживаемость собак с остеосаркомами локализованными дистальнее лучезапястного или скакательного сустава несколько больше (~ 466 суток), по сравнению с остеосаркомами, расположенными в «традиционных» местах периферического скелета [24].

Остеосаркома расположенная на костях осевого скелета (позвоночный столб) встречается редко, является локально агрессивной с частыми местными рецидивами при хирургическом лечении [21, 175]. У 15 собак, которым проводили операцию, лучевую и химиотерапию, медиана продолжительности жизни составила 4 месяца [175]. У собак с остеосаркомой расположенной на костях таза, которым провели гемипельвэктомию, частота местных рецидивов и метастазирования составила 21% и 46%, соответственно, медиана продолжительности жизни составила 533 дня, а 1-а и 2-ух годичная выживаемость — 53% и 35% [176].

Внекостная локализация остеосаркомы встречается редко и чаще всего поражает висцеральные органы (ЖКТ, селезенка, печень, почки, мочевой пузырь), кожу, подкожные ткани и молочные железы. Для таких опухолей характерено агрессивное биологическое поведение с высокой частотой метастазирования. По данным одного исследования, собаки, которым провели только хирургическое удаление опухоли, имели продолжительность жизни всего 1 месяц, а добавление к лечению химиотерапии увеличивало выживаемость ~ 5 месяцев [27]. В еще одном исследовании сроки выживания после хирургической операции для остеосарком мягких тканей, составили 1 месяц, а молочных желез — 3 месяца [28]. Основной причиной смерти был местный рецидив (92%)(мягкие ткани) и метастазирование в легкие (62,5%)(молочные железы).

Прогноз для собак с III стадией заболевания — плохой, проведение метастазэктомии улучшает выживаемость [114, 177]. Медиана продолжительности жизни с III стадией заболевания составили 76 суток. Медиана продолжительности жизни с метастазами в кости (132 дня) была выше, чем у собак с метастазами в легкие (59 дней) или с метастазами в легкие и другие мягкие ткани (19 дней).

У собак с метастазами в лимфатические узлы медиана продолжительности жизни (59 дней) была значительно ниже, чем у собак без метастазов (318 дней)[113, 114].У собак с III стадией заболевания, которым была проведена метастазэктомия, медиана продолжительности жизни (232 дня) была значительно больше, чем у собак, которым не проводилась метастазэктомия (49 дней)[177].

Щелочная фосфатаза

Повышенная активность щелочной фосфатазы (ЩФ) связана с худшим прогнозом у собак с остеосаркомой периферического скелета и ребер [113, 159, 162, 164, 178-181]. Предоперационное повышение активности ЩФ (более 110 Ед/л) связано с более короткой продолжительностью жизни.

Точные причины, по которым ЩФ оказывает влияние на прогноз, до конца не понятны [96б182, 183].

Молекулярные, генетические и иммунологические факторы

Экспрессия некоторых молекулярных протеинов, таких как эзрин, рецептор нантского происхождения (RON), сурвивин, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), циклооксигеназа-2 (ЦОГ-2) и белок теплового шока (HSP), влияет на продолжительность безрецидивного периода и продолжительность жизни [98, 184-188].

Эзрин — это белок, входящий в семейство эзрин–радиксин–моезин (ЭРМ), представители которого функционируют как линкеры между белками плазматической мембраны и актиновым цитоскелетом. В исследованиях на мышах было продемонстрированно влияние эзрина на развитие метастазов остеосаркомы [98]. Благодаря использованию тканевой микроматрицы собак, известно, что наличие высокого уровня окрашивания эзрина в первичных опухолях связано со значительно более короткой медианой продолжительности жизни (116 суток).

Рецепторы фактора роста гепатоцитов (MET) и RON входят в семейство рецепторных тирозинкиназ протоонкогена MET, и передача сигнала через MET или RON способствует опухолеобразованию и формированию метастазов. MET и RON способны гетеродимеризоваться друг с другом, что приводит к клеточному перекрестному взаимодействию, которое может изменять силу и продолжительность трансдукции сигнала с последующими протуморогенными эффектами. Учитывая роль MET и RON в развитии метастазов, их экспрессия была изучена у собак с остеосаркомами [184]. Благодаря использованию тканевой микроматрицы остеосаркомы собак, экспрессия RON, но не MET, оказалась прогностически важной. У собак с высокой экспрессией RON в первичных опухолях наблюдалось значительное снижение продолжительности жизни, по сравнению с собаками с отсутствующей, низкой или промежуточной экспрессией RON.

Сурвивин — небольшой белок, принадлежащий к семейству ингибиторов апоптоза и участвующий в процессах клеточного деления, а также ингибирования апоптоза. В виде димера сурвивин ингибирует как каспазозависимый, так и каспазонезависимый опосредованный апоптоз, а его экспрессия может способствовать развитию опухоли. Учитывая антиапоптотические свойства сурвивина, его избыточная экспрессия может обеспечивать раковым клеткам преимущество в выживании и ассоциироваться с неблагоприятным прогнозом. В одном из исследований экспрессия сурвивина была выявлена в 67 первичных образцах остеосаркомы [186]. Экспрессия сурвивина была обнаружена в 65 образцах тканей, а интенсивность экспрессии была связана с продолжительностью безрецидивного периода. У собак с первичными опухолями и низким уровнем иммунореактивности сурвивина, продолжительность безрецидивного периода была значительно выше (331 день), чем у собак с высоким уровнем иммунореактивности сурвивина (173 дня).

VEGF и ферментативная активность ЦОГ-2, служат мощными регуляторами ангиогенеза, а их экспрессия ассоциируется с более плохим прогнозом при различных видах рака. Учитывая, что ангиогенез является необходимым этапом для роста и метастазирования опухоли, как VEGF, так и ЦОГ-2 были исследованы у собак с остеосаркомами [185, 187, 189]. В одном исследовании 25 собак, которым была проведена операция и системная химиотерапия, исходная концентрация VEGF в сыворотке крови, скорректированная по тромбоцитам, была связана с безрецидивным периодом, но не с продолжительностью жизни [187]. У собак с концентрацией VEGF в нижнем 50-м процентиле, безрецидивный период был значительно дольше (356 дней), по сравнению с собаками с уровнем VEGF в верхнем 50-м процентиле (145 дней). В двух исследованиях экспрессия ЦОГ-2 была изучена в первичных опухолях, полученных от 44 и 27 собак, положительное окрашивание COX-2 было выявлено в 88% и 93% опухолей [185,189]. У собак, которым провели ампутацию и химиотерапию доксорубицином, показатель иммунореактивности ЦОГ-2, представляющий собой произведение интенсивности окрашивания и процента положительных клеток, потенциально коррелировал с исходом заболевания. У собак с первичными опухолями, демонстрирующими сильную интенсивность окрашивания, медиана продолжительности жизни была значительно короче (86 дней), чем у собак с опухолями, окрашивающимися отрицательно (423 дня), слабо (399 суток) или умеренно (370 суток). Глобальный анализ экспрессии генов в стволовых клетках собачьей остеосаркомы показал, что транскрипция гена ЦОГ-2 в стволовых клетках была в 141 раз больше по сравнению с нестволовыми клетками; это позволяет предположить, что активность ЦОГ-2 может играть роль в инициации и прогрессии опухоли [190].

Белки теплового шока (HSP) играют важнейшую роль в клеточных реакциях на стрессовое воздействие, способствуют правильному свертыванию белков и защите клеток после стрессовых воздействий на эндоплазматический ретикулум, которые в противном случае вызывают запрограммированную гибель клеток. Раковые клетки могут дерегулировать экспрессию HSP в пользу выживания и экспрессия генов HSP была исследована у собак с остеосаркомами. В исследовании было обнаружено, что повышенная экспрессия HSP60 ассоциируется с уменьшением безрецидивного периода и продолжительности жизни в группе пациентов, достигших долгосрочного контроля за опухолью. Полученные результаты позволяют предположить, что чрезмерная экспрессия HSP60 может быть связана с плохим прогнозом у собак с остеосаркомой [188].

Благодаря почти полному секвенированию собачьего генома и коммерческой доступности генной микроматрицы для собак, стало возможным охарактеризовать и подтвердить специфические опухоль-ассоциированные генетические детерминанты, связанные с клиническим результатом лечения и прогнозом. В одном из исследований по профилированию экспрессии генов были проанализированы первичные ткани остеосаркомы от двух групп собак с различными клиническими результатами лечения, а именно у собак, с медианой безрецидивного периода, либо менее 100 суток, либо более 300 суток [106]. По результатам анализа тканевой матрицы и контролем методом RT-PCR, восемь специфических генных транскриптов значительно отличались между двумя группами. У собак, отнесенных к группе с низким безрецидивным периодом, шесть транскриптов, включая инсулиноподобный фактор роста II и алкогольдегидрогеназу, были снижены, а два транскрипта были повышены по сравнению со второй группой [106].

В аналогичном исследовании по профилированию экспрессии были получены прогностические генные профили из 32 первичных остеосарком, полученных от двух групп собак на основании продолжительности жизни [191]. Собаки, прожившие менее 6 месяцев или более 6 месяцев, были отнесены к группе c плохой или хорошей выживаемостью, соответственно. Генный профиль выявил 51 транскрипт генов, которые были дифференциально экспрессированы. В группе с плохой выживаемостью, гены, экспрессирующиеся равномерно, были связаны с биологическими путями, участвующими в пролиферации, лекарственной устойчивости и метастазировании. Помимо выявления дифференциально экспрессированных генов и связанных с ними путей, между собаками, отнесенными к группам с хорошей и плохой выживаемостью, результаты исследования подтвердили сходство молекулярных путей у людей и собак, включая сигналы Wnt, интегрины и хемокины/цитокины.

Еще в одном исследовании, в котором использовался более однородный генетический фон собак с диагнозом остеосаркомы для выявления закономерностей экспрессии генов, ранее не обнаруживаемых при историческом анализе генных микроматрицы собак и людей [192]. С помощью дифференциального профилирования экспрессии генов в клеточных линиях остеосаркомы, полученных из первичных опухолей, исследователи смогли выявить генные сигнатуры, связанные с G2/M переходом и контрольной точкой повреждения ДНК, а также взаимодействием с микроокружением, что позволило непредвзято разделить образцы остеосаркомы на различные молекулярные подклассификации и предсказать результат. Что особенно важно, те же генетические сигнатуры, выявленные у собак, позволили провести прогностическую молекулярную классификацию остеосаркомы у человека, что убедительно подчеркивает научную ценность сравнительных онкологических исследований.

Нарушения в иммунной системе распространены среди онкологических больных, а регуляторные Т-клетки (Tregs) и миелоидные супрессорные клетки способны ослаблять эффективный противоопухолевый иммунный ответ, что может негативно повлиять на прогноз. Tregs были изучены у здоровых и больных раком собак [193-195], причем некоторые исследования показали, что у собак с остеосаркомой увеличивается процентное и абсолютное количество циркулирующих Tregs [196]. Клиническое значение Tregs для прогноза лечения остеосаркомы, было недавно изучено в исследовании 12 собак, которым провели ампутацию и системную химиотерапию [196]. У собак с высоким (выше среднего) и низким (ниже среднего) процентом Tregs, выявленных в крови или опухолевой ткани, не было различий в безрецидивном периоде или продолжительности жизни; однако высокое или низкое соотношение CD8/Treg в крови было связано с клиническим исходом болезни, поскольку у собак с низким соотношением CD8/Treg, продолжительность жизни была значительно короче, чем у собак с высоким соотношением CD8/Treg.

В одном из исследований, помимо Treg (регуляторные T-клетки) и их потенциального прогностического значения при остеосаркоме, было продемонстрировано, что рутинные показатели анализа крови — в частности, количество лимфоцитов и моноцитов — также могут предсказывать клинические исходы у собак с ОСА [163]. У 69 собак, которым провели ампутацию и системную химиотерапию, исходное количество лимфоцитов и моноцитов было связано с безрецидивным периодом. Более короткий период безрецидивного периода наблюдался у собак с относительным лимфоцитозом (≥1000 клеток/ мл) и моноцитозом (≥400 клеток/ мл), и эти первоначальные результаты были дополнительно подтверждены второй популяцией собак с остеосаркомой, получавших идентичное лечение. Была выдвинута гипотеза, что связь между моноцитозом и снижением безрецидивного периода может быть связана с присутствием миелоидных супрессорных клеток — популяции клеток, характеризующихся способностью подавлять противоопухолевый иммунный ответ.

Недавно была проведена оценка предполагаемой роли регуляции моноцитов и макрофагов — как фенотип и хемотаксическая функция моноцитов могут быть нарушены у собак с остеосаркомой [197]. У 18 собак с остеосаркомой экспрессия на поверхности клеток множества хемокиновых рецепторов, в частности CCR2 и CXCR2, была снижена в моноцитах периферической крови, что потенциально могло привести к снижению направленной миграции и экстравазации. Кроме того, моноциты собак с остеосаркомой были функционально неполноценны, что проявлялось в снижении хемотаксиса ex vivo. Эти результаты могут объяснить, почему у собак с остеосаркомой может быть повышен уровень циркулирующих моноцитов, а также предоставить потенциальные механизмы, с помощью которых клетки остеосаркомы могут обходить врожденную иммунную систему через индукцию хемотаксической дисфункции моноцитов.

В другом исследовании изучалось иммунное микроокружение первичной остеосаркомы собак, в котором была выявлена взаимосвязь инфильтратов макрофагов (CD204+) и лимфоцитов (как эффекторных CD3+, так и регуляторных Foxp3 T-клеток) в первичной опухоли с безрецидивным периодом и продолжительностью жизни у 30 собак, которым провели ампутацию и химиотерапию карбоплатином [198]. Хотя степень и фенотип инфильтратов лимфоцитов первичной опухоли не влияли на прогноз, площадь инфильтрации макрофагами влияла на исход лечения. У собак, у которых площадь инфильтрации CD204+ макрофагами составляла более 4,7 %, продолжительность безрецидивного периода была значительно выше. Полученные данные позволяют предположить, что инфильтрирующие опухоль макрофаги могут способствовать торможению метастазирования остеосаркомы.

Лечение собак с остеосаркомой

Лечение собак с остеосаркомами комплексное и, как правило, состоит из локальной терапии, направленной на первичную опухоль, и системной терапии, направленной на профилактику или борьбу с метастазами опухоли.

Локальная терапия опухоли

К методам местной терапии первичной опухоли, относят хирургию (ампутацию конечности, органосохранную операцию), облучение и локальную химиотерапию.

Хирургическое лечение остеосаркомы у собак

Ампутация конечности

Ампутация пораженной конечности (рисунок 6) является стандартным методом лечения собак с остеосаркомой костей периферического скелета. Часто даже крупные и гигантские породы собак хорошо передвигаются на трех конечностях после ампутации, а большинство владельцев довольны результатом операции и качеством жизни животного. По данным исследований, примерно у 88% собак после ампутации не меняется качество жизни и 73% животных сохраняют привычную активность [199, 200].

Перед решением вопроса об ампутации, важно провести полноценный ортопедический и неврологический осмотр собаки, чтобы исключить сопутствующие патологии в других конечностях, которые могут отразиться на функциональном результате после операции.

Адаптация к передвижению после ампутации происходит примерно через 4-6 недель, однако часть собак до операции не пользуется пораженной опухолью конечностью и быстрее привыкают перемещаться на трех конечностях. Реабилитация улучшает функциональные результаты после операции.

**Рисунок 6**. Собаки после ампутации конечности по причине остеосаркомы. При правильном подборе пациентов и реабилитации у большинства собак сохраняется хорошее качество жизни и физическая активность.

Органосохранная операция (протезирование кости)

В ряде случаев возможно удалить опухоль и заместить дефект в кости при помощи различных методов протезирования, что позволяет обойтись без ампутации. Органосохранные операции позволяют сохранить функцию конечности и являются методом выбора при наличии у собаки противопоказаний к проведению ампутации (различные ортопедические и неврологические заболевания). Протезирование конечности позволяет получить удовлетворительную или хорошую функцию конечности в большинстве случаев [201-205]. Проведение ампутации или протезирования не оказывают значимого влияния на продолжительность жизни [206].

Подходящими кандидатами для протезирования являются собаки с неметастатическим поражением кости и вовлечением в процесс менее 50% от ее длинны. Другими критериями являются: отсутствие патологического перелома и минимальное вовлечение в процесс окружающих кость мягких тканей. В неоадьювантном режиме, перед проведением протезирования, проводят химиотерапию и/или облучение [207, 208].

Наилучшие функциональные результаты получаются при локализации опухоли в дистальном сегменте лучевой или локтевой кости, так как артродез лучезапястного сустава хорошо переносится собаками. Артродез плечевого, коленного и скакательного сустава приводит в большинстве случаев к удовлетворительным функциональным результатам [162].

Существуют различные методы органосохранных операций (рисунок 7): замещение дефекта аллокостью, протезом, дистракционный остеосинтез, интраоперационное облучение и реплантация кости, аутотрансплантация кости [209-229].

Органосохранные операции при остеосаркоме у собак — **Рисунок 7**. Различные методы органосохранных операций при остеосаркомах у собак: (А) замещение дефекта аллокостью, (B-C) замещение дефекта протезом, (D) дистракционный остеосинтез.

Нехирургическая терапия

Стереотаксическая радиотерапия

Стереотаксическая радиотерапия (СТР) у собак с остеосаркомами позволяет облучить опухоль высокой дозой, при этом минимизируя дозу для окружающих новообразование, здоровых тканей (рисунок 8). Адъювантная терапия карбоплатином сразу после лучевой терапии улучшает результаты из-за своего сенситизирующего действия. К возможным осложнениям терапии относят: риск патологического перелома, инфицирования и повреждения кожных покровов. Функциональные результаты после стереотаксической радиотерапии хорошие [230].

В одном исследовании на 46 собаках с остеосаркомами, применяли однократную дозу СТР (~ 30 Гр) и химиотерапию в адъювантном режиме [231]. Медиана продолжительности жизни составила 9.7 месяцев. В 63% случаях произошел патологический перелом кости с медианой в 5.9 месяцев. Острое и позднее повреждение кожи развилось в 58% и 16% случаев, соответственно.

Некоторые ветеринарные онкологи предпочитают проведение СТР для собак с остеосаркомами. Протоколы СТР обычно включают в себя 2-3 фракции по 8-13 Гр, а самым популярным протоколом является применение трех фракций облучения по 10 Гр. Терапию проводят в течение 3 дней подряд или с интервалом в сутки.

Патологический перелом является самым частым осложнением при проведении СТР. Переломы развиваются из-за некроза опухоли и костной ткани, а также предшествующему опухолевому лизису кости. Лечение патологического перелома заключается в остеосинтезе или ампутации конечности. В ряде случаев, перед проведением СТР проводят остеосинтез конечности для профилактики патологического перелома [111, 112, 231, 232]. Хотя по данным некоторых исследований, проведение остеосинтеза перед СТР нерекомендованно из-за высокой частоты инфицирования имплантов.

На данный момент исследуются новые протоколы для минимизации частоты патологических переломов после СТР [234].

Плюсами СТР является возможность сохранения хорошей функции конечности, особенно при локализациях опухолей в недоступных для протезирования местах. Минусами: высокая частота патологических переломов и необходимость наличия дорогостоящего оборудования.

**Рисунок 8**. Стереотаксическая радиотерапия у собак c остеосаркомами. На рисунки изображено планирование лучевой терапии и осложнения после процедуры (патологические переломы).

Локальная химиотерапия опухоли

Локальная химиотерапия описана у людей и собак с саркомами и меланомами в качестве основной или вспомогательной терапии [235-237]. Локальная терапия позволяет достичь высокой концентрации химиотерапевтических средств в определенной зоне организма и снизить их системное токсическое воздействие. Успешная локальная химиотерапия описана у собак с остеосаркомами [235]. Возможно применение локальной химиотерапии перед проведением органосохранной операции.

Системное введение ¹⁵³Sm-EDTMP ограничено из-за его системного токсического действия. В одном исследовании, ¹⁵³Sm-EDTMP (37 мБк/кг) вводили в конечность изолированно от системной циркуляции в течение 1 часа 9 собакам с остеосаркомами за 3 недели до ампутации. Системный токсический эффект не отмечался. Процент некроза опухоли составил 27.6%, что незначительно отличается от процента некроза опухоли без терапии [233].

Резюме по органосохранным операциям у собак с остеосаркомами

Нет значимой разницы в продолжительности жизни при проведении ампутации или органосохранной операции. Основное влияние на продолжительность жизни оказывает химиотерапия [206]. Удовлетворительная или хорошая функция конечности отмечается примерно в 80% случаев [17]. Проведение органосохранной операции требует хорошего взаимопонимания с владельцем и командой ветеринарных врачей. Органосохранную операцию обычно комбинируют различными вариантами адъювантной терапии. На каждом этапе лечения (химиотерапия, операция, облучение) возможно развитие осложнений. Высокие дозы облучения могут провоцировать развитие патологического перелома или инфекции [203].

Основными осложнениями при проведении органосохранных операций являются: инфицирование, рецидив опухоли и несостоятельность импланта. В исследовании результатов органосохранных операций у 220 собак с остеосаркомами, 1-годичный безрецидивный период составил 76% и 60% собак прожили более года [206]. Для снижения частоты местных рецидивов, в предоперационном периоде можно применять лучевую терапию, локальную химиотерапию или имплантацию полимера с цисплатином.

В двух исследованиях у 40% и 47.5% собак, соответственно, развилась инфекция аллотрансплантата [206, 240]. В большинстве случаев адекватный контроль за инфекцией достигался системным применением антибиотиков или локальной имплантации полимера с антибиотиками [162]. У части животных сохраняются признаки инфекции, однако функция конечности остается хорошей или удовлетворительной. В запущенных случаях может потребоваться удаление имплантата или проведение ампутации конечности.

Интересной находкой является то, что развитие инфекции увеличивает медиану продолжительности жизни [214, 241, 242]. Схожие данные были получены и у людей при проведении органосохранных операций [243]. Исследования на мышах были получены данные о усилении системной противоопухолевой защиты при развитии хронической бактериальной инфекции [244].

Лучевая терапия

В настоящее время, основная роль лучевой терапии заключается в уменьшении болевого синдрома. Применение высоких доз, может приводить к некрозу клеток остеосаркомы с целью дальнейшего проведения органосохранной операции или основной локальной терапии опухоли [203, 205, 262-264]. В исследовании проведенном на 14 собак, лучевая терапия применялась, как основной метод лечения остеосаркомы (системно также применяли химиотерапию), медиана продолжительности жизни составила 209 суток [265]. Стереотаксическая радиотерапия становится все более популярным методом лечения, так как позволяет воздействовать на клетки остеосаркомы высокой дозой облучения, при этом минимально повреждая окружающие ткани.

Системная адъювантная терапия собак с остеосаркомами

Вышеописанные методы локального воздействия на первичную опухоль (ампутация, протезирование, облучение), позволяют эффективно контролировать или устранить остеосаркому, однако минимально влияют на сроки появления метастазов. Основное влияние на увеличение продолжительности оказывает системная химиотерапия.

Хотя химиотерапия на данный момент является самым эффективным методом борьбы с метастазами остеосаркомы у собак, маловероятно что новые химиотерапевтические средства или изменение дозировок/комбинаций существующих лекарств, значимо улучшит результаты лечения. Скорее всего, прогресс в лечении остеосаркомы будет достигнут за счет комбинирования традиционных химиотерапевтических средств с таргетной молекулярной терапией или иммуномодулирующими препаратами.

Химиотерапия

Карбоплатин в монорежиме

Карбоплатин является препаратом производным платины второго поколения, который обладает менее нефротоксичным действием по сравнению с цисплатином.

В одном исследовании собакам с остеосаркомой проводили ампутацию конечности с 4-мя курсами карбоплатина в дозировке 300 мг/м2 с интервалом в 21 день [160]. Карбоплатин хорошо переносился животными, токсичность отмечалась в виде дозозависимой нейтропении. Безрецидивный период и медиана продолжительности жизни составила 257 и 321 суток, соответственно. Собаки, которые прошли полноценный курс из 4 введений карбоплатина имели безрецидивный период и медиану продолжительности жизни 327 и 383 дня, соответственно.

В исследовании проведенном группой ветеринарных онкологов (VCOG) на 155 собаках с остеосаркомами, которым провели ампутацию и вводили карбоплатин в различных дозировках и схемах, медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 256 и 307 суток [270]. В другом исследовании у 65 собак с остеосаркомами, проводили ампутацию конечности и химиотерапию карбоплатином в дозе 300 мг/м² каждый 21 день (4-6 введений), была получена медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни 137 и 277 суток, соответственно [271].

Доксорубицин в монорежиме

Доксорубицин считается эффективным препаратом для борьбы с метастазами остеосаркомы у собак. Противометастатический эффект лучше всего достигается при введении доксорубицина каждые 2 недели, по сравнению с введением раз в 3 недели. В одном исследовании препарат вводили в дозе 30 мг/м² каждые 2 недели, 2-3 курса перед ампутацией и несколько после операции (всего 5 введений)[272]. 1-а и 2-ух годичная выживаемость составила 50.5% и 9.7%, соответственно.

Комбинация доксорубицина и карбоплатина

Из-за высокой токсичности применения доксорубицина и цисплатина [273, 274], было проведено исследование в котором для снижения токсичности цисплатин заменили карбоплатином. В исследовании после ампутации собакам проводили химиотерапию карбоплатином (175 мг/м²) в первый день, далее доксорубицин (15 мг/м²) на вторые сутки [275]. Химиотерапию вводили каждые 3 недели, максимум 4 введения. Переносимость препаратов оценивали как хорошую, умеренная ЖКТ токсичность отмечалась примерно в 50% случаев, гематологическая токсичность 3 и более степени встречалась раньше. Медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 195 и 235 суток, соответственно. Результаты такой комбинированной химиотерапии сопоставимы с введением этих препаратов в монорежиме.

В другом исследовании [276], проведенном на 32 собаках с остеосаркомами, изучалось переносимость высоких доз доксорубицина (30 мг/м² или 1.0 мг/кг при массе тела до 15 кг) и карбоплатина (300 мг/м² или 10 мг/кг при массе тела до 15 кг) в адъювантом режиме, после проведения ампутации или органосохранной операции. Химитерапию проводили каждые 3 недели, а препараты чередовали между собой. Максимально число введений – 3 раза (3 раза карбоплатин и 3 раза доксорубицин). В 1 случае отмечалась нейтропения III степени, в другом – тромбоцитопения III степени и еще в 1 случае – рвота (всего было введено 66 доз карбоплатина и 82 дозы доксорубицина). Медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 227 и 320 суток, соотвественно. 1-а и 2-ух годичная выживаемость составила 48% и 18%.

Еще в одном исследовании [277], проведенном на 50 собаках, животных лечили ампутацией и через 10-14 суток после операции, начинали химиотерапию, чередую каждые 3 недели между собой карбоплатин (300 мг/м²) и доксорубицин (30 мг/м²). Гематологическая токсичность III-IV степени отмечалась в 18% случаев, ЖКТ токсичность III-IV степени – 12% случаев. Медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 202 и 258 суток, соответственно.

Существует еще ряд исследований, в которых изучались различные режимы введения доксорубицина и карбоплатина [278, 279, 208, 280]. Результаты этих исследований схожи с выше описанными.

В исследованиях комбинаций карбоплатина и доксорубицина с метрономным введением различных препаратов (пироксикама, мелоксикама, циклофосфамида) не было получено существенного увеличения безрецидивного периода и продолжительности жизни [281, 282].

Иммунохимиотерапия

Несмотря на то, что в медицине применяются различные виды иммунотерапии (моноклональные антитела, дендритно-клеточные вакцины) для борьбы с метастазами, в ветеринарии существует всего несколько исследований, посвященных этому вопросу. Есть исследование, изучающее противоопухолевый эффект от применения инкапсулированного в липосомы мурамила трипептида фосфатидилэтаноламина (L-MPT-PE) у собак с остеосаркомами. L-MPT-PE является синтетическим аналогом компонента стенки микобактерий, который усиливает противоопухолевую активность альвеолярных макрофагов у собак, что повышает цитотоксичность против клеток остеосаркомы in vitro [283].

В одном клиническом исследовании [284], проведенном на 27 собаках, оценивался эффект L-MPT-PE в монорежиме после ампутации. Препарат вводили внутривенно два раза в неделю, в течение 8 недель. Применение L-MPT-PE увеличивало медиану безрецидивного периода (168 суток) и продолжительности жизни (222 дня) по сравнению с контрольной группой (58 и 77 суток, соответственно).

В исследовании, изучающим эффективность комбинации L-MPT-PE с цисплатином [285], была получена большая продолжительность жизни по сравнению с контрольной группой – 14.4 против 9.8 месяцев. В данном исследовании L-MPT-PE начинали применять после проведения полного курса цисплатины (1 введение каждые 4 недели, общее число введений препарата — 4).

В другом исследовании L-MPT-PE начинали применять одновременно с проведением химиотерапии цисплатином [285]. Животных разделили на три группы: (1) цисплатин + L-MPT-PE 1 раз в неделю, (2) цисплатин + L-MPT-PE 1 раз в 2 недели и (3) цисплатин + плацебо. Медиана продолжительности жизни составила 10.3, 10.5 и 7.6 месяцев, соответственно.

Есть исследование изучающее степень воспаления, апоптоза и некроза опухоли после внутриопухолевого введения аденовирусного вектора для лиганда мембранной молекулы Fas (Ad-FasL)[286]. В этом исследовании 52 собакам с остеосаркомами проводили внутриопухолевое введение Ad-FasL за 10 дней до проведения ампутации с дальнейшей химиотерапией карбоплатином. После ампутации проводили гистологическое исследование опухоли с целью оценки степени локального воспаления, апоптоза, некроза и лимфоцитарной инфильтрации. Собаки с более выраженной степенью воспаления и инфильтрации лимфоцитами имели большую медиану безрецидивного периода и продолжительности жизни. В исследовании степень воспаления разделили на две категории – низкую (1) или высокую (2-3), медиана продолжительности жизни составила 198 и 359 суток, соответственно.

Для дополнительной стимуляции иммунного ответа, существуют вакцины индуцирующие специфический противоопухолевый T-клеточный ответ против эпитопов HER2/neu, которые экспрессируются клетками остеосаркомы собак [287]. При помощи внутривенного введения аттенуированных рекомбинантных Listeria monocytogenes, экспрессирующих химерный человеческий HER2/neu+ белок (ADXS31-164), оценивали способность вызывать специфический HER2 иммунный ответ у 18 собак с остеосаркомами, которым вводили три дозы ADXS31-164 с интервалом в 3 недели, после завершения традиционной терапии (ампутация или органосохранная операция и четыре курса химиотерапии карбоплатином). У 15 собак HER2-специфическую реакцию можно было оценить путем количественного определения антиген-индуцированной секреции Т-клеточного интерферона-гамма (IFNγ), что являлось иммунным биомаркером для измерения иммунной реакции, вызванной вакцинацией ADXS31-164. Хотя секреция Т-клеточного IFNγ не коррелировала с долгосрочным выживанием, величина повышения уровня лейкоцитов, нейтрофилов и моноцитов через 24 часа после ведения ADXS31-164 была значительно выше у собак с продолжительностью жизни более 18 месяцев. Результаты исследования позволяют предположить, что врожденные иммунные реакции способствуют противоопухолевому эффекту при введении ADXS31-164. В целом, адъювантное применение ADXS31-164 после стандартной терапии, хорошо переносилось, а у собак отмечался длительный контроль за опухолью – медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 615 и 956 суток, соответственно.

Таргетная терапия у собак с остеосаркомой

Сигнальный каскад гормона роста и фактора роста ИФР-1 (IGF-1) был исследован при остеосаркоме. Роль гормона роста (ГР) и ИФР-1 в патогенезе остеосаркомы подтверждается несколькими клиническими наблюдениями как у людей, так и у собак. Так как гормон роста и ИФР-1 играют ключевую роль в росте скелета и гомеостазе, было сделано предположение, что аберрантная или избыточная сигнализация ГР и ИФР-1, играет значимую роль в патогенезе остеосаркомы [288]. Для оценки биологического эффекта ослабления аутокринной и/или паракринной сигнализации ГР и ИФР-1 при остеосаркоме, было проведено клиническое исследование на 44 собаках с остеосаркомами, в котором концентрация циркулирующего ИФР-1 подавлялась приемом аналога соматостатина длительного действия (Onco-LAR)[268]. Всем собакам проводили ампутацию конечности и химиотерапию карбоплатином в комбинации с Onco-LAR. Применение Onco-LAR приводило к снижению на 43% циркулирующего ИФР-1 по сравнению с контрольной группой, однако такая супрессия ИФР-1 не увеличивала безрецидивный период или продолжительность жизни собак.

Молекулярная терапия, способная задерживать или подавлять развитие легочных метастазов, значительно улучшает результаты лечения. В связи с этим, были разработаны новые противоопухолевые препараты, которые селективно ингибируют процессы, необходимые для успешной инвазии и метастазирования опухолевых клеток. Одним из способов является ингибирование матриксных металлопротеиназ (MMP) – протеолитических ферментов, вовлеченных в процесс локальной инвазии опухоли и метастазирования. На основании документально подтвержденной желатинолитической активности MMP-2 и MMP-9 в клеточных линиях собак и образцах остеосаркомы [91, 93], было сделано предположение о том, что специфические ингибиторы активность MMP могут увеличить период без метастазов после ампутации и химиотерапии. Проспективное, двойное слепое, рандомизированное и плацебо-контролируемое клиническое исследование по оценки активности ингибитора MMP-2 (BAY 12-9566), было проведено на 223 собаках с неметастатической остеосаркомой [180]. После ампутации и химиотерапии доксорубицином, собакам ежедневно применяли BAY 12-9566 (10 мг/кг). Дополнительное применение BAY 12-9566 не приводило к увеличению медианы безрецидивного периода и продолжительности жизни по сравнению с контрольной группой. Прием препарата не приводил к изменению концентрации MMP-2 и MMP-9 в сыворотке крови в сравнении с контрольной группой.

С началом применения тоцераниба в ветеринарии, этот молекулярный ингибитор нескольких киназных сигнальных путей (KIT, рецептор VEGF 2 [VEGFR2], рецептор фактора роста тромбоцитов [PDGFR]), вызвал научный интерес, так как его включили в качестве вспомогательной терапии для собак с остеосаркомами. В одном исследовании на 126 собаках с остеосаркомами, которым проводили ампутацию конечности и вводили четыре дозы карбоплатина, применяли метрономную терапию (циклофосфамид и пироксикам) или тоцераниб. Тоцераниб хорошо переносился собаками, однако медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни была сопоставимой с контрольной группой – 215/242 дня (метрономная терапия) и 233/318 суток (тоцераниб)[289].

Повышение чувствительности клеток остеосаркомы к стандартным химиотерапевтическим средствам, может повысить эффективность их применения, продлить безрецидивный период и продолжительность жизни. Сурамин – полисульфонированная нафтилмочевина, продемонстрировала способность повышать чувствительность опухоли к химиотерапии. Эффективность вещества была оценена на 47 собаках с остеосаркомой в комбинации с доксорубицином. Сурамин вводили внутривенно в дозе 6,75 мг/кг, далее через 4 часа вводили доксорубицин в дозе 30 мг/м², препараты вводили каждые 2 недели (всего 5 курсов). Комбинация сурамина и доксорубицина хорошо переносилась, а медиана безрецидивного периода и продолжительности жизни составила 203 и 369 суток, соотвественно. К сожалению, дизайн этого исследования не позволяет сделать окончательные выводы относительно способности адъювантного сурамина усиливать противоопухолевую активность доксорубицина [290].

Лечение метастатической болезни

Хирургическое удаление метастазов

Хирургическое удаление метастазов остеосаркомы или других опухолей описано у собак и людей [207, 291]. В одном исследовании на 36 собаках с метастазами остеосаркомы в легкие, проводили метастазэктомию (частичная или полная лобэктомия доли легкого). Химиотерапию не проводили после удаления метастазов. Общая медиана продолжительности жизни составила 487 суток (176 суток после проведения метастазэктомии).

Подходящими кандидатами для удаления метастазов были животные: (1) с ремиссией первичной опухоли более 300 суток; (2) на рентгенограммах визуализируется не более 1-2 очагов в легких; (3) метастазы локализуются только в легких и (4) время удвоения опухолевой массы более 30 дней.

Метастазэктомию также можно проводить для устранения гипертрофической (легочной) остеопатии [292].

Химиотерапия и ингибиторы рецепторов тирозинкиназы

Лечение метастатического поражения остеосаркомы традиционной химиотерапией или ингибиторами тирозинкиназы – малоэффективно. Низкая эффективность терапии скорее всего связано с развитием резистентности и плохой биодоступностью препарата из-за большого объема опухолевых клеток.

В одном исследовании на 45 собаках, у которых после стандартной терапии (хирургия и системная химиотерапия) появились объемные метастазы остеосаркомы или они поступали на прием уже с метастазами, применяли химиотерапию в монорежиме различными препаратами: цисплатин, доксорубицин и митоксантрон [293]. Только у одной собаки был достигнут частичный и кратковременный ответ (21 сутки). Полученные результаты говорят о том, что традиционные препараты, которые показали свою эффективность в адъювантном режиме, неэффективный для борьбы с объемными и/или множественными метастазами остеосаркомы.

В другом исследовании оценивалась переносимость и противоопухолевая активность паклитаксела у собак с объемными метастазами. У 2 из 9 собак был достигнут частичный ответ, что позволяет сделать предположение о небольшой эффективности ингибиторов деполимеризации микротрубочек у собак с метастазами остеосаркомы [298].

Тоцераниб изучали на предмет противоопухолевой активности в широком диапазоне различных опухолей, в том числе метастатической легочной остеосаркомы [295]. Основываясь на способности тоцераниба ингибировать множественные сигнальные пути, его эффективность была изучена ретроспективно у 23 собак с метастазами остеосаркомы в легкие [296]. Тоцераниб применяли в дозе 2.7 мг/кг (через день или 3 раза в неделю). Частичный ответ наблюдался у одной собаки (4.3%) и стабилизация опухолей у 10 животных (43.5%).

В одном проспективном исследовании, 22 собаки с метастазами остеосаркомы в легкие, получали тоцераниб в дозе 2.75 мг/кг 3 раза в неделю. Контрольные осмотры проводили через 2, 3, 4 и 8 недель. Стабилизация и прогрессия заболевания отмечалась в 17.6% и 83.4% случаев, соответственно [297]. В другом ретроспективном исследовании на 20 собаках, тоцераниб показал свою низкую эффективность для лечения метастазов [298]. Основываясь на полученных из исследований данных, можно сделать вывод о низкой эффективности применения тоцераниба в монорежиме для борьбы с объемными метастазами остеосаркомы у собак.

Паллиативная терапия собак с остеосаркомой

Паллиативная лучевая терапия

Лучевая терапия является методом выбора лечения костной боли у людей со злокачественными новообразованиями. Ее также активно применяют у собак с первичными новообразованиями костей. Анальгезирующий эффект ионизирующей радиации частично связан с индукцией клеточной гибели злокачественных остеобластов и остеокластов [307], что задокументировано у собак благодаря оценки степени некроза опухоли [205, 239, 308]. Таким образом, ионизирующее излучение может уменьшить общий объем опухоли и ослабить степень резорбции остеокластами. Быстрое наступление анальгезии, которое происходит до изменения объема опухоли, позволяет предположить, что в обезболивающем эффекте лучевой терапии участвуют другие, пока неизвестные механизмы. Предполагаемые механизмы анальгезии, вызванной облучением, включают истощение местных воспалительных клеток и ингибирование созревания предшественников остеокластов [309].

Существуют различные протоколы облучения в ветеринарной литературе, в большинстве из которых применяют 2-4 фракции от 6 до 10 Гр. Несмотря на то, что результаты этих исследований были различными и субъективными, облегчение боли при опухолях костей было достигнуто у 74-93% собак. Хотя у большинства собак после паллиативной лучевой терапии симптоматика улучшилась, средний промежуток времени субъективного облегчения боли, был непродолжительным и колебался от 53 до 130 дней [234, 310-314].

Учитывая, что большинство традиционных протоколов паллиативной лучевой терапии включают только 2-4 фракции, общая кумулятивная доза облучения относительно невелика (<32 Гр). В результате острая и поздняя лучевая токсичность не является ограничивающим фактором для большинства пациентов. Хотя мегавольтажное паллиативное облучение является эффективным методом краткосрочного обезболивания, некоторые исследования показывают, что одновременное назначение внутривенной химиотерапии, вместе с лучевой терапией, может улучшить обезболивающий эффект, продолжительность ответа и общую эффективность облучения [313, 315].

Радиоактивные фармацевтические препараты

¹⁵³Sm — это радиоизотоп, который подвергается гамма- (103 кэВ) и бета-распаду (максимум 810 кэВ), что позволяет одновременно проводить исследование его биораспределения, а также терапевтического действия. Когда ¹⁵³Sm конъюгируется с EDTMP, который является бисфосфонатом, полученное соединение 153Sm-EDTMP, концентрируется в областях с повышенной остеобластической активностью и связывается с открытыми кристаллами гидроксиапатита [316]. Благодаря своему остеотропному действию и определенному радиусу излучения, ¹⁵³Sm-EDTMP в настоящее время используется в качестве радиофармпрепарата для паллиативного лечения мультифокальных скелетных метастазов у людей с карциномой молочной или предстательной железы [317].

Использование ¹⁵³Sm-EDTMP было исследовано для облегчения боли при раке костей у собак с аппендикулярной и аксиальной остеосаркомой [318-322]. У собак, получавших ¹⁵³Sm-EDTMP, прогнозируемый эквивалент дозы облучения, достигаемый в костной опухоли, оценивается примерно в 20 Гр [318], хотя ожидается, что его внутриопухолевое биораспределение будет неоднородным, на основании региональных различий в репаративной опухолевой активности. После внутривенного введения ¹⁵³Sm-EDTMP у 63-83% собак с остеосаркомой отмечается улучшение показателей хромоты и уровня активности, что свидетельствует об облегчении боли [318-321]. При поражении осевого скелета, у четырех собак было зафиксировано улучшение состояния на 21 день после лечения, на основании уменьшения размера опухоли или улучшения клинических признаков, в то время как у 13 собак наблюдалось прогрессирование заболевания [322].

¹⁷⁷Лютеций (¹⁷⁷Lu) – это изотоп, который испускает гамма-фотоны (208 кэВ) и бета-частицы (максимум 497 кэВ). ¹⁷⁷Lu был исследован в комплексе с EDTMP или DOTMP, макроциклическим аналогом EDMTP. Предполагается, что ¹⁷⁷Lu оказывает более щадящее воздействие на костный мозг по сравнению с ¹⁵³Sm-EDTMP, благодаря меньшей проникающей способности в мягкие ткани (670 мкм). Профиль токсичности ¹⁷⁷Lu-DOTMP был оценен на нормальных собаках, и не было отмечено значительных изменений в количестве тромбоцитов и лейкоцитов, но были легкие изменения в количестве эритроцитов на 84-й день [323]. Пилотное исследование было проведено на четырех собаках с первичными или метастатическими поражениями скелета, и у трех собак был продемонстрирован анальгетический эффект [324]. У пациентов ¹⁷⁷Lu-ЭДТМП одинаково эффективно вызывает анальгезию по сравнению с ¹⁵³Sm-ЭДТМП при сходном профиле токсичности [325].

Аминобисфосфонаты

Аминобисфосфонаты (АБФ) — синтетические аналоги неорганического пирофосфата, которые первоначально использовались для диагностических целей при сканировании костей на основе их способности преимущественно адсорбироваться в местах активного минерального ремоделирования костей. Фармацевтическое использование АБФ получило широкое признание в терапии неопухолевых заболеваний костной резорбции у людей, таких как остеопороз и болезнь Педжета [326]. Помимо лечения этих метаболических нарушений, АБФ считаются препаратами первой линии для лечения злокачественных остеолитических заболеваний скелета, включая паранеопластическую гиперкальциемию, множественную миелому и метастатические заболевания костей у онкологических больных [327, 328].

Эффективное лечение костных заболеваний с помощью АБФ объясняется их дифференцированным воздействием на резорбцию и минерализацию костной ткани. В концентрациях, безопасно достижимых in vivo, АБФ ингибируют резорбцию кости, не подавляя ее минерализацию. Механистически защитные эффекты АБФ на костную ткань проявляются через индукцию апоптоза остеокластов, что приводит к чистому ослаблению патологической резорбции кости [329, 330]. В частности, АБФ вмешиваются в посттрансляционное пренилирование малых ГТФ-связывающих белков, включая Ras, Rho и Rac [331]. Нарушение работы этих малых ГТФ-связывающих белков приводит к сбою нормальной внутриклеточной сигнализации и взаимодействия с внеклеточным матриксом, тем самым вызывая апоптоз остеокластов.

Учитывая, что остеосаркома характеризуется очаговым и агрессивным злокачественным остеолизисом, исследование АБФ стало предметом клинического интереса. Первым описанием в ветеринарной литературе стало применение перорального алендроната для паллиативного лечения двух собак с остеосаркомами. [332]. Основываясь на неожиданно длительном периоде продолжительности жизни, о котором сообщалось в этом исследовании, авторы предположили, что терапия АБФ может играть определенную роль в лечении злокачественных заболеваний костей у собак. Учитывая, что внутривенные АБФ исторически использовались для лечения злокачественного остеолизиса у людей, было проведено проспективное исследование по оценке безопасности внутривенного введения памидроната 33 собакам с диагнозом первичных и вторичных опухолей скелета [333]. Внутривенное введение памидроната (1,0 мг/кг, разбавленный 0,9% раствором натрия хлорида до общего объема 250 мл) в виде 2-часовой инфузии с постоянной скоростью (ИПС) каждые 28 дней, хорошо переносился, а у некоторой группы собак были зафиксированы клинически значимые терапевтические эффекты внутривенного введения памидроната: значительное снижение концентрации N-телопептида (NTx) в моче, увеличение относительной минеральной плотности кости первичной опухоли (rBMD) по данным двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA) и субъективное уменьшение боли.

После того как была установлена безопасность внутривенного введения памидроната у собак с опухолями скелета, было проведено второе исследование с участием 43 собак, получавших внутривенно памидронат (1,0 мг/кг против 2,0 мг/кг), с целью дальнейшего изучения биологической активности препарата для лечения аппендикулярной боли в костях, связанной с остеосаркомой, и патологической резорбции костей [334]. У 28 % из собак удалось добиться облегчения боли более чем на 4 месяца. Помимо субъективного обезболивающего эффекта памидроната, о котором сообщали владельцы животных, изменения концентрации NTx в моче и rBMD оцененная с помощью DEXA, коррелировали с терапевтическим ответом.

Хотя первоначальные исследования были посвящены паллиативному эффекту памидроната, при использовании его в качестве отдельного препарата, в недавнем исследовании была зафиксирована синергетическая активность памидроната в сочетании с паллиативной лучевой терапией у собак с остеосаркомой [335]. В проспективном двойном слепом рандомизированном плацебо-контролируемом клиническом исследовании 17 собак с остеосаркомой, которые проходили паллиативную лучевую терапию (8 Гр в день 1 и 2) и получали либо инфузию 0,9% физиологического раствора (плацебо), либо памидронат один раз в 4 недели в течение трех процедур. Перед началом паллиативного облучения и после каждой внутривенной терапии 0,9% физиологическим раствором или памидронатом, всех собак оценивали с помощью анализа походки, концентрации NTx в моче, оценки качества жизни и анкетирования владельцев. У собак группы плацебо наблюдалось значительное увеличение выраженности хромоты между 0-12 неделями, а в группе с памидронатом, значительно уменьшилась степень хромоты на 12-й неделе. Судя по этим результатам, добавление памидроната к паллиативной лучевой терапии, повышает эффективность и результативность лечения.

В двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании 50 собак с остеосаркомами применяли паллиативную лучевую терапию, водили доксорубицин и плацебо с физиологическим раствором или памидронатом [336]. Медиана эффективного обезболивания у собак, получавших адъювантную терапию памидронатом или физраствором, составила 76 и 75 дней соответственно. Несмотря на очевидное отсутствие ощущаемой владельцем животного анальгезии, собаки, получавшие адъювантную терапию памидронатом, имели лучшие показатели качества жизни и, что более важно, уменьшение опухолевой резорбции костей. В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что адъювантная терапия памидронатом может не улучшать анальгезию, когда собаки уже проходят облучение и химиотерапию доксорубицином.

Несмотря на то, что в большинстве исследований было задокументировано действие памидроната, у собак с опухолями скелета оценивались другие, более мощные АБФ для лечения боли в костях при злокачественных новообразованиях. Золедронат обладает в 100 раз большей антирезорбтивной активностью, чем памидронат, и имеет еще одно преимущество – его можно безопасно вводить в течение более короткого периода времени, чем другие АБФ. В одном клиническом случае, внутривенное введение золедроната каждые 28 дней было эффективным для длительного обезболивания собаки с остеосаркомой в дистальном сегменте лучевой кости [337]. Костно-биологические эффекты внутривенного введения золедроната были оценены у 10 собак с первичными и вторичными опухолями скелета [338]. Золедронат вводили в дозе 0,25 мг/кг в виде 15-минутной ИПС каждые 28 дней. Пациенты, получавшие многократные инфузии, хорошо переносили препарат, без явных биохимических признаков почечной токсичности. У 50% из 10 собак с аппендикулярной остеосаркомой боль уменьшилась более чем на 4 месяца. Эти собаки продемонстрировали значительное увеличение rBMD, что позволяет предположить, что золедронат подавляет опухолевый остеолиз и возникновение боли. Хотя исследования, оценивающие безопасность длительного применения памидроната или золедроната у собак с первичными и вторичными опухолями костей, не были тщательно проанализированы, сообщалось о редких и серьезных изменениях метаболизма костной ткани, таких как остеонекроз челюсти, у одной собаки, получавшей ежемесячно золедронат (0,1 мг/кг внутривенно, 15-минутная ИПС) в течение 43 месяцев подряд [339].

Сравнительные аспекты остеосарком у людей

Для ряда заболеваний, животные могу быть моделями для лучшего понимания механизмов и этиологии болезней, а также для разработки и совершенствования лечебных стратегий. Спонтанно развивающиеся заболевания в популяции животных особенно полезны для этих целей [340-342].

Остеосаркома у собак имеет много общего с остеосаркомой у людей, схожая клиническая картина, биологическое поведение и метастазирование [7, 341]. Остеосаркома чаще встречается у собак по сравнению с людьми и поэтому накопление клинических случаев происходит быстрее. Другой важный момент – прогрессирование опухоли происходит быстрее у собак, поэтому оценить эффективность новой терапии получается раньше по сравнению с людьми.

Остеосаркома редко встречается у людей, поражая в основном подростков 20-25 лет, а болезнь протекает агрессивно. Новые протоколы позволяют продлить продолжительность жизни у людей, в качестве медикаментов используют высокие дозы метотрексата, доксорубицина и цисплатина. 5-ти летняя выживаемость составляет 60-70%, что контрастирует с 20% выживаемостью в начале 1980 годов. Недавнее ретроспективное исследование 251 пациента показало, что 5-ти летняя выживаемость увеличилась с 36% в 1980 годах до 67% в начале 2000. В течение этого периоде органосохранные операции стали проводиться чаще (с 53% до 97%)[343].

Плохими прогностическими факторами являются: пожилой возраст, продвинутая локальная или системная стадия опухоли, аксиальная локализация, большой опухолевый объем [344]. Некроз опухоли более чем на 90% после неоадъювантной химиотерапии связан с лучшей выживаемостью (5-ти летняя выживаемость 75-80%, а при некрозе менее 90% – 45-50%)[345].

Список литературы

Brodey RS, Mc GJ, Reynolds H: A clinical and radiological study of canine bone neoplasms. I, J Am Vet Med Assoc 134:53–71, 1959.
Brodey RS, Sauer RM, Medway W: Canine bone neoplasms, J Am Vet Med Assoc 143:471–495, 1963.
Dorfman SK, Hurvitz AI, Patnaik AK: Primary and secondary bone tumours in the dog, J Small Anim Pract 18:313–326, 1977.
Ling GV, Morgan JP, Pool RR: Primary bone tumors in the dog; a combined clinical, radiographic, and histologic approach to early diagnosis, J Am Vet Med Assoc 165:55–67, 1974.
Priester WA, McKay FW: The occurrence of tumors in domestic animals, Natl Cancer Inst Monogr 1–210, 1980.
Withrow SJ, Powers BE, Straw RC, et al.: Comparative aspects of osteosarcoma. Dog versus man, Clin Orthop Relat Res 159–168, 1991.
Alexander JW, Patton CS: Primary tumors of the skeletal system, Vet Clin North Am Small Anim Pract 13:181–195, 1983.
Brodey RS, Abt DA: Results of surgical treatment in 65 dogs with osteosarcoma, J Am Vet Med Assoc 168:1032–1035, 1976.
Jongeward SJ: Primary bone tumors, Vet Clin North Am Small Anim Pract 15:609–641, 1985.
Knecht CD, Priester WA: Musculoskeletal tumors in dogs, J Am Vet Med Assoc 172:72–74, 1978.
Misdorp W: Skeletal osteosarcoma. Animal model; canine osteosarcoma, Am J Pathol 98:285–288, 1980.
Misdorp W, Hart AA: Some prognostic and epidemiologic factors in canine osteosarcoma, J Natl Cancer Inst 62:537–545, 1979.
Nielsen SW, Schroder JD, Smith DL: The pathology of osteogenic sarcoma in dogs, J Am Vet Med Assoc 124:28–35, 1954.
Smith RL, Sutton RH: Osteosarcoma in dogs in the Brisbane area, Aust Vet Pract 18:97–100, 1988.
Spodnick GJ, Berg J, Rand WM, et al.: Prognosis for dogs with appendicular osteosarcoma treated by amputation alone; 162 cases (1978-1988), J Am Vet Med Assoc 200:995–999, 1992.
Straw RC, Withrow SJ, Richter SL, et al.: Amputation and cisplatin for treatment of canine osteosarcoma, J Vet Intern Med 5:205–210, 1991.
Tjalma RA: Canine bone sarcoma; estimation of relative risk as a function of body size, J Natl Cancer Inst 36:1137–1150, 1966.
Wolke RE, Nielsen SW: Site incidence of canine osteosarcoma, J Small Anim Pract 7:489–492, 1966.
Feeney DA, Johnston GR, Grindem CB, et al.: Malignant neoplasia of canine ribs; clinical, radiographic, and pathologic findings, J Am Vet Med Assoc 180:927–933, 1982.
Heyman SJ, Diefenderfer DL, Goldschmidt MH, et al.: Canine axial skeletal osteosarcoma. A retrospective study of 116 cases (1986 to 1989), Vet Surg 21:304–310, 1992.
Ru G, Terracini B, Glickman LT: Host related risk factors for canine osteosarcoma, Vet J 156:31–39, 1998.
Cooley DM, Beranek BC, Schlittler DL, et al.: Endogenous gonadal hormone exposure and bone sarcoma risk, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 11:1434–1440, 2002.
Gamblin RM, Straw RC, Powers BE, et al.: Primary osteosarcoma distal to the antebrachiocarpal and tarsocrural joints in nine dogs (1980-1992), J Am Anim Hosp Assoc 31:86–91, 1995.
LaRue SM, Withrow SJ, Wrigley RH: Radiographic bone surveys in the evaluation of primary bone tumors in dogs, J Am Vet Med Assoc 188:514–516, 1986.
Bech-Nielsen S, Haskins ME, Reif JS, et al.: Frequency of osteosarcoma among first-degree relatives of St. Bernard dogs, J Natl Cancer Inst 60:349–353, 1978.
Kuntz CA, Dernell WS, Powers BE, et al.: Extraskeletal osteosarcomas in dogs; 14 cases, J Am Anim Hosp Assoc 34:26–30, 1998.
Langenbach A, Anderson MA, Dambach DM, et al.: Extraskeletal osteosarcomas in dogs; a retrospective study of 169 cases (1986-1996), J Am Anim Hosp Assoc 34:113–120, 1998.
Patnaik AK: Canine extraskeletal osteosarcoma and chondrosarcoma; a clinicopathologic study of 14 cases, Vet Pathol 27:46–55, 1990.
Ringenberg MA, Neitzel LE, Zachary JF: Meningeal osteosarcoma in a dog, Vet Pathol 37:653–655, 2000.
Thamm DH, Mauldin EA, Edinger DT, et al.: Primary osteosarcoma of the synovium in a dog, J Am Anim Hosp Assoc 36:326–331, 2000.
Owen LN: Transplantation of canine osteosarcoma, Eur J Cancer 5:615–620, 1969.
Gellasch KL, Kalscheur VL, Clayton MK, et al.: Fatigue microdamage in the radial predilection site for osteosarcoma in dogs, Am J Vet Res 63:896–899, 2002.
Bennett D, Campbell JR, Brown P: Osteosarcoma associated with healed fractures, J Small Anim Pract 20:13–18, 1979.
Knecht CD, Priester WA: Osteosarcoma in dogs — study of previous trauma, fracture, and fracture fixation, J Am An Hosp Assoc 14:82–84, 1978.
Sinibaldi K, Rosen H, Liu SK, et al.: Tumors associated with metallic implants in animals, Clin Orthop Relat Res 257–266, 1976.
Stevenson S, Hohn RB, Pohler OE, et al.: Fracture-associated sarcoma in the dog, J Am Vet Med Assoc 180:1189–1196, 1982.
Vasseur PB, Stevenson S: Osteosarcoma at the site of a cortical bone allograft in a dog, Vet Surg 16:70–74, 1987.
Gillette SM, Gillette EL, Powers BE, et al.: Radiation-induced osteosarcoma in dogs after external beam or intraoperative radiation therapy, Cancer Res 50:54–57, 1990.
Lloyd RD, Taylor GN, Angus W, et al.: Distribution of skeletal malignancies in beagles injected with 239Pu citrate, Health Phys 66:407–413, 1994.
McEntee MC, Page RL, Theon A, et al.: Malignant tumor formation in dogs previously irradiated for acanthomatous epulis, Vet Radiol Ultrasound 45:357–361, 2004.
Miller SC, Lloyd RD, Bruenger FW, et al.: Comparisons of the skeletal locations of putative plutonium-induced osteosarcomas in humans with those in beagle dogs and with naturally occurring tumors in both species, Radiat Res 160:517–523, 2003.
Powers BE, Gillette EL, McChesney SL, et al.: Bone necrosis and tumor induction following experimental intraoperative irradiation, Int J Radiat Oncol Biol Phys 17:559–567, 1989.
Robinson E, Neugut AI, Wylie P: Clinical aspects of postirradiation sarcomas, J Natl Cancer Inst 80:233–240, 1988.
Tillotson C, Rosenberg A, Gebhardt M, et al.: Postradiation multicentric osteosarcoma, Cancer 62:67–71, 1988.
White RG, Raabe OG, Culbertson MR, et al.: Bone sarcoma characteristics and distribution in beagles fed strontium-90, Radiat Res 136:178–189, 1993.
White RG, Raabe OG, Culbertson MR, et al.: Bone sarcoma characteristics and distribution in beagles injected with radium-226, Radiat Res 137:361–370, 1994.
White RG, Raabe OG, Culbertson MR, et al.: Bone sarcoma characteristics and distribution in beagles injected with radium-226, Radiat Res 137:361–370, 1994.
Johnson AS, Couto CG, Weghorst CM: Mutation of the p53 tumor suppressor gene in spontaneously occurring osteosarcomas of the dog, Carcinogenesis 19:213–217, 1998.
Kirpensteijn J, Kik M, Teske E, et al.: TP53 gene mutations in canine osteosarcoma, Vet Surg 37:454–460, 2008.
Levine RA, Fleischli MA: Inactivation of p53 and retinoblastoma family pathways in canine osteosarcoma cell lines, Vet Pathol 37:54–61, 2000.
Loukopoulos P, Thornton TR, Robinson WF: Clinical and pathologic relevance of p53 index in canine osseous tumors, Vet Pathol 40:237–248, 2003.
Mendoza S, Konishi T, Dernell WS, et al.: Status of the p53, Rb and MDM2 genes in canine osteosarcoma, Anticancer Res 18:4449–4453, 1998.
Sagartz JE, Bodley WL, Gamblin RM, et al.: p53 tumor suppressor protein overexpression in osteogenic tumors of dogs, Vet Pathol 33:213–221, 1996.
Setoguchi A, Sakai T, Okuda M, et al.: Aberrations of the p53 tumor suppressor gene in various tumors in dogs, Am J Vet Res 62:433–439, 2001.
vanLeeuwen IS, Cornelisse CJ, Misdorp W, et al.: p53 gene mutations in osteosarcomas in the dog, Cancer Lett 111:173–178, 1997.
Thomas R, Wang HXJ, Tsai PC, et al.: Influence of genetic background on tumor karyotypes; evidence for breed-associated cytogenetic aberrations in canine appendicular osteosarcoma, Chromosome Res 17:365–377, 2009.
Levine AJ, Chang AW, Dittmer D, et al.: The P53 tumor-suppressor gene, J Lab Clin Med 123:817–823, 1994.
Cam M, Gardner HL, Roberts RD, et al.: DeltaNp63 mediates cellular survival and metastasis in canine osteosarcoma, Oncotarget 7:48533–48546, 2016.
Wadayama B, Toguchida J, Shimizu T, et al.: Mutation spectrum of the retinoblastoma gene in osteosarcomas, Cancer Res 54:3042–3048, 1994.
Scott MC, Sarver AL, Tomiyasu H, et al.: Aberrant retinoblastoma (RB)-E2F transcriptional regulation defines molecular phenotypes of osteosarcoma, J Biol Chem 290:28070–28083, 2015.
Levine RA, Forest T, Smith C: Tumor suppressor PTEN is mutated in canine osteosarcoma cell lines and tumors, Vet Pathol 39:372–378, 2002.
Angstadt AY, Motsinger-Reif A, Thomas R, et al.: Characterization of canine osteosarcoma by array comparative genomic hybridization and RT-qPCR; signatures of genomic imbalance in canine osteosarcoma parallel the human counterpart, Genes Chromosomes Cancer 50:859–874, 2011.
Angstadt AY, Thayanithy V, Subramanian S, et al.: A genome-wide approach to comparative oncology; high-resolution oligonucleotide a CGH of canine and human osteosarcoma pinpoints shared microaberrations, Cancer Genet 205:572–587, 2012.
Cooley DM, Waters DJ: Skeletal neoplasms of small dogs; a retrospective study and literature review, J Am Anim Hosp Assoc 33:11–23, 1997.
Phillips J, Lembcke L, Chamberlin T: Genetics of osteosarcoma in the Scottish deerhound, J Vet Intern Med 24:675–675, 2010.
Phillips JC, Lembcke L, Chamberlin T: A novel locus for canine osteosarcoma (OSA1) maps to CFA34, the canine orthologue of human 3q26, Genomics 96:220–227, 2010.
Phillips JC, Stephenson B, Hauck M, et al.: Heritability and segregation analysis of osteosarcoma in the Scottish deerhound, Genomics 90:354–363, 2007.
Rosenberger JA, Pablo NV, Crawford PC: Prevalence of and intrinsic risk factors for appendicular osteosarcoma in dogs; 179 cases (1996–2005), J Am Vet Med Assoc 231:1076–1080, 2007.
Urfer SR, Gaillard C, Steiger A: Lifespan and disease predispositions in the Irish Wolfhound; a review, Vet Q 29:157–157, 2017.
Karlsson EK, Sigurdsson S, Ivansson E, et al.: Genome-wide analyses implicate 33 loci in heritable dog osteosarcoma, including regulatory variants near CDKN2A/B, Genome Biol 14:R132, 2013.
Dillberger JE, McAtee SA: Osteosarcoma inheritance in two families of Scottish deerhounds, Canine Genet Epidemiol 4(3), 2017.
Sarver AL, Thayanithy V, Scott MC, et al.: MicroRNAs at the human 14q32 locus have prognostic significance in osteosarcoma, Orphanet J Rare Dis 8(7), 2013.
Fenger JM, Roberts RD, Iwenofu OH, et al.: MiR-9 is overexpressed in spontaneous canine osteosarcoma and promotes a metastatic phenotype including invasion and migration in osteoblasts and osteosarcoma cell lines, BMC Cancer 16:784, 2016.
Lopez CM, Yu PY, Zhang X, et al.: MiR-34a regulates the invasive capacity of canine osteosarcoma cell lines, PLoS One 13:e0190086, 2018.
Fox MH, Armstrong LW, Withrow SJ, et al.: Comparison of DNA aneuploidy of primary and metastatic spontaneous canine osteosarcomas, Cancer Res 50:6176–6178, 1990.
Liao AT, McCleese J, Kamerling S, et al.: A novel small molecule Met inhibitor, PF2362376, exhibits biological activity against osteosarcoma, Vet Comp Oncol 5:177–196, 2007.
Liao AT, McMahon M, London CA: Characterization, expression and function of c-Met in canine spontaneous cancers, Vet Comp Oncol 3:61–72, 2005.
MacEwen EG, Kutzke J, Carew J, et al.: c-Met tyrosine kinase receptor expression and function in human and canine osteosarcoma cells, Clin Exp Metastasis 20:421–430, 2003.
Ferracini R, Angelini P, Cagliero E, et al.: MET oncogene aberrant expression in canine osteosarcoma, J Orthop Res 18:253–256, 2000.
Liao AT, McMahon M, London CA: Identification of a novel germline MET mutation in dogs, Anim Genet 37:248–252, 2006.
Fieten H, Spee B, Ijzer J, et al.: Expression of hepatocyte growth factor and the proto-oncogenic receptor c-Met in canine osteosarcoma, Vet Pathol 46:869–877, 2009.
MacEwen EG, Pastor J, Kutzke J, et al.: IGF-1 receptor contributes to the malignant phenotype in human and canine osteosarcoma, J Cell Biochem 92:77–91, 2004.
Maniscalco L, Iussich S, Morello E, et al.: PDGFs and PDGFRs in canine osteosarcoma: New targets for innovative therapeutic strategies in comparative oncology, Vet J 190:39–47, 2011.
Gorlick R, Huvos AG, Heller G, et al.: Expression of HER2/erbB-2 correlates with survival in osteosarcoma, J Clin Oncol 17:2781–2788, 1999.
Scotlandi K, Manara MC, Hattinger CM, et al.: Prognostic and therapeutic relevance of HER2 expression in osteosarcoma and Ewing’s sarcoma, Eur J Cancer 41:1349–1361, 2005.
Flint AF, U’Ren L, Legare ME, et al.: Overexpression of the erbB-2 proto-oncogene in canine osteosarcoma cell lines and tumors, Vet Pathol 41:291–296, 2004.
Gordon IK, Ye F, Kent MS: Evaluation of the mammalian target of rapamycin pathway and the effect of rapamycin on target expression and cellular proliferation in osteosarcoma cells from dogs, Am J Vet Res 69:1079–1084, 2008.
Paoloni MC, Mazcko C, Fox E, et al.: Rapamycin pharmacokinetic and pharmacodynamic relationships in osteosarcoma; a comparative oncology study in dogs, PLoS One 5:e11013, 2010.
Shahi MH, Holt R, Rebhun RB: Blocking signaling at the level of GLI regulates downstream gene expression and inhibits proliferation of canine osteosarcoma cells, PLoS One 9:e96593, 2014.
Dailey DD, Anfinsen KP, Pfaff LE, et al.: HES1, a target of Notch signaling, is elevated in canine osteosarcoma, but reduced in the most aggressive tumors, BMC Vet Res 9:130, 2013.
Loukopoulos P, O’Brien T, Ghoddusi M, et al.: Characterisation of three novel canine osteosarcoma cell lines producing high levels of matrix metalloproteinases, Res Vet Sci 77:131–141, 2004.
Barger AM, Fan TM, de Lorimier LP, et al.: Expression of receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) in neoplasms of dogs and cats, J Vet Intern Med 21:133–140, 2007.
Lana SE, Ogilvie GK, Hansen RA, et al.: Identification of matrix metalloproteinases in canine neoplastic tissue, Am J Vet Res 61:111–114, 2000.
Schmit JM, Pondenis HC, Barger AM, et al.: Cathepsin K expression and activity in canine osteosarcoma, J Vet Intern Med 26:126–134, 2012.
Marley K, Bracha S, Seguin B: Osteoprotegerin activates osteosarcoma cells that co-express RANK and RANKL, Exp Cell Res 338:32–38, 2015.
Neumann ZL, Pondenis HC, Masyr A, et al.: The association of endothelin-1 signaling with bone alkaline phosphatase expression and protumorigenic activities in canine osteosarcoma, J Vet Intern Med 29:1584–1594, 2015.
Shor S, Fadl-Alla BA, Pondenis HC, et al.: Expression of nociceptive ligands in canine osteosarcoma, J Vet Intern Med 29:268–275, 2015.
Khanna C, Wan X, Bose S, et al.: The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis, Nat Med 10:182–186, 2004.
Fan TM, Barger AM, Fredrickson RL, et al.: Investigating CXCR4 expression in canine appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 22:602–608, 2008.
Byrum ML, Pondenis HC, Fredrickson RL, et al.: Downregulation of CXCR4 expression and functionality after zoledronate exposure in canine osteosarcoma, J Vet Intern Med 30:1187–1196, 2016.
Barger A, Graca R, Bailey K, et al.: Use of alkaline phosphatase staining to differentiate canine osteosarcoma from other vimentin-positive tumors, Vet Pathol 42:161–165, 2005.
Neihaus SA, Locke JE, Barger AM, et al.: A novel method of core aspirate cytology compared to fine-needle aspiration for diagnosing canine osteosarcoma, J Am Anim Hosp Assoc 47:317–323, 2011.
Britt T, Clifford C, Barger A, et al.: Diagnosing appendicular osteosarcoma with ultrasound-guided fine-needle aspiration; 36 cases, J Small Anim Pract 48:145–150, 2007.
Kirpensteijn J, Kik M, Rutteman GR, et al.: Prognostic significance of a new histologic grading system for canine osteosarcoma, Vet Pathol 39:240–246, 2002.
Schott CR, Tatiersky LJ, Foster RA, et al.: Histologic grade does not predict outcome in dogs with appendicular osteosarcoma receiving the standard of care, Vet Pathol 55:202–211, 2018.
O’Donoghue LE, Ptitsyn AA, Kamstock DA, et al.: Expression profiling in canine osteosarcoma; identification of biomarkers and pathways associated with outcome, BMC Cancer 10:506, 2010.
Bhandal J, Boston SE: Pathologic fracture in dogs with suspected or confirmed osteosarcoma, Vet Surg 40:423–430, 2011.
Kim MS, Lee SY, Lee TR, et al.: Prognostic effect of pathologic fracture in localized osteosarcoma; a cohort/case controlled study at a single institute, J Surg Oncol 100:233–239, 2009.
Ebeid W, Amin S, Abdelmegid A: Limb salvage management of pathologic fractures of primary malignant bone tumors, Cancer Control 12:57–61, 2005.
Bacci G, Ferrari S, Longhi A, et al.: Nonmetastatic osteosarcoma of the extremity with pathologic fracture at presentation; local and systemic control by amputation or limb salvage after preoperative chemotherapy, Acta Orthop Scand 74:449–454, 2003.
Boston SE, Vinayak A, Lu X, et al.: Outcome and complications in dogs with appendicular primary bone tumors treated with stereotactic radiotherapy and concurrent surgical stabilization, Vet Surg 46:829–837, 2017.
Covey JL, Farese JP, Bacon NJ, et al.: Stereotactic radiosurgery and fracture fixation in 6 dogs with appendicular osteosarcoma, Vet Surg 43:174–181, 2014.
Hillers KR, Dernell WS, Lafferty MH, et al.: Incidence and prognostic importance of lymph node metastases in dogs with appendicular osteosarcoma; 228 cases (1986-2003), J Am Vet Med Assoc 226:1364–1367, 2005.
Boston SE, Ehrhart NP, Dernell WS, et al.: Evaluation of survival time in dogs with stage III osteosarcoma that undergo treatment; 90 cases (1985-2004), J Am Vet Med Assoc 228:1905–1908, 2006.
Giuliano AE, Feig S, Eilber FR: Changing metastatic patterns of osteosarcoma, Cancer 54:2160–2164, 1984.
Bacci G, Avella M, Picci P, et al.: Metastatic patterns in osteosarcoma, Tumori 74:421–427, 1988.
Moore GE, Mathey WS, Eggers JS, et al.: Osteosarcoma in adjacent lumbar vertebrae in a dog, J Am Vet Med Assoc 217(1008):1038–1040, 2000.
Talbott JL, Boston SE, Milner RJ, et al.: Retrospective evaluation of whole body computed tomography for tumor staging in dogs with primary appendicular osteosarcoma, Vet Surg 46:75–80, 2017.
Oblak ML, Boston SE, Woods JP, et al.: Comparison of concurrent imaging modalities for staging of dogs with appendicular primary bone tumours, Vet Comp Oncol 13:28–39, 2015.
Sivacolundhu RK, Runge JJ, Donovan TA, et al.: Ulnar osteosarcoma in dogs; 30 cases (1992-2008), J Am Vet Med Assoc 243:96–101, 2013.
Montinaro V, Boston SE, Buracco P, et al.: Clinical outcome of 42 dogs with scapular tumors treated by scapulectomy; a Veterinary Society of Surgical Oncology (VSSO) retrospective study (1995-2010), Vet Surg 42:943–950, 2013.
Straw RC, Powers BE, Klausner J, et al.: Canine mandibular osteosarcoma; 51 cases (1980-1992), J Am Anim Hosp Assoc 32:257–262, 1996.
Dickerson ME, Page RL, LaDue TA, et al.: Retrospective analysis of axial skeleton osteosarcoma in 22 large-breed dogs, J Vet Intern Med 15:120–124, 2001.
Selmic LE, Lafferty MH, Kamstock DA, et al.: Outcome and prognostic factors for osteosarcoma of the maxilla, mandible, or calvarium in dogs; 183 cases (1986-2012), J Am Vet Med Assoc 245:930–938, 2014.
Coyle VJ, Rassnick KM, Borst LB, et al.: Biological behaviour of canine mandibular osteosarcoma. A retrospective study of 50 cases (1999-2007), Vet Comp Oncol 13:89–97, 2015.
Amsellem PM, Selmic LE, Wypij JM, et al.: Appendicular osteosarcoma in small-breed dogs; 51 cases (1986-2011), J Am Vet Med Assoc 245:203–210, 2014.
Boulay JP, Wallace LJ, Lipowitz AJ: Pathological fracture of long bones in the dog, J Am An Hosp Assoc 23:297–303, 1987.
Mazzaferro EM, Hackett TB, Stein TP, et al.: Metabolic alterations in dogs with osteosarcoma, Am J Vet Res 62:1234–1239, 2001.
Story AL, Boston SE, Kilkenny JJ, et al.: Evaluation of weight change during carboplatin therapy in dogs with appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 31:1159–1162, 2017.
Kazmierski KJ, Ogilvie GK, Fettman MJ, et al.: Serum zinc, chromium, and iron concentrations in dogs with lymphoma and osteosarcoma, J Vet Intern Med 15:585–588, 2001.
Wrigley RH: Malignant versus nonmalignant bone disease, Vet Clin North Am Small Anim Pract 30:315–347, 2000. vi-vii.
Charney VA, Miller MA, Heng HG, et al.: Skeletal metastasis of canine urothelial carcinoma; pathologic and computed tomographic features, Vet Pathol 54:380–386, 2017.
Reinhardt S, Stockhaus C, Teske E, et al.: Assessment of cytological criteria for diagnosing osteosarcoma in dogs, J Small Anim Pract 46:65–70, 2005.
Samii VF, Nyland TG, Werner LL, et al.: Ultrasound-guided fine-needle aspiration biopsy of bone lesions; a preliminary report, Vet Radiol Ultrasound 40:82–86, 1999.
Ehrhart N: Principles of tumor biopsy, Clin Tech Small Anim Pract 13:10–16, 1998.
Mankin HJ, Lange TA, Spanier SS: The hazards of biopsy in patients with malignant primary bone and soft-tissue tumors, J Bone Joint Surg Am 64:1121–1127, 1982.
de Santos LA, Murray JA, Ayala AG: The value of percutaneous needle biopsy in the management of primary bone tumors, Cancer 43:735–744, 1979.
Simon MA: Biopsy of musculoskeletal tumors, J Bone Joint Surg Am 64:1253–1257, 1982.
Wykes PM, Withrow SJ, Powers BE, et al.: Closed biopsy for diagnosis of long-bone tumors — accuracy and results, J Am Anim Hosp Assoc 21:489–494, 1985.
Powers BE, LaRue SM, Withrow SJ, et al.: Jamshidi needle biopsy for diagnosis of bone lesions in small animals, J Am Vet Med Assoc 193:205–210, 1988.
Vignoli M, Ohlerth S, Rossi F, et al.: Computed tomography-guided fine-needle aspiration and tissue-core biopsy of bone lesions in small animals, Vet Radiol Ultrasound 45:125–130, 2004.
Barthez PY, Hornof WJ, Theon AP, et al.: Receiver operating characteristic curve analysis of the performance of various radiographic protocols when screening dogs for pulmonary metastases, J Am Vet Med Assoc 204:237–240, 1994.
Picci P, Vanel D, Briccoli A, et al.: Computed tomography of pulmonary metastases from osteosarcoma; the less poor technique. A study of 51 patients with histological correlation, Ann Oncol 12:1601–1604, 2001.
Waters DJ, Coakley FV, Cohen MD, et al.: The detection of pulmonary metastases by helical CT; a clinicopathologic study in dogs, J Comput Assist Tomogr 22:235–240, 1998.
Karnik KS, Samii VF, Weisbrode SE, et al.: Accuracy of computed tomography in determining lesion size in canine appendicular osteosarcoma, Vet Radiol Ultrasound 53:273–279, 2012.
Armbrust LJ, Biller DS, Bamford A, et al.: Comparison of three-view thoracic radiography and computed tomography for detection of pulmonary nodules in dogs with neoplasia, J Am Vet Med Assoc 240:1088–1094, 2012.
Eberle N, Fork M, von Babo V, et al.: Comparison of examination of thoracic radiographs and thoracic computed tomography in dogs with appendicular osteosarcoma, Vet Comp Oncol 9:131–140, 2011.
Berg J, Lamb CR, O’Callaghan MW: Bone scintigraphy in the initial evaluation of dogs with primary bone tumors, J Am Vet Med Assoc 196:917–920, 1990.
Hahn KA, Hurd C, Cantwell HD: Single-phase methylene diphosphate bone scintigraphy in the diagnostic evaluation of dogs with osteosarcoma, J Am Vet Med Assoc 196:1483–1486, 1990.
Jankowski MK, Steyn PF, Lana SE, et al.: Nuclear scanning with 99mTc-HDP for the initial evaluation of osseous metastasis in canine osteosarcoma, Vet Comp Oncol 1:152–158, 2003.
Lamb CR: Bone scintigraphy in small animals, J Am Vet Med Assoc 191:1616–1622, 1987.
Parchman MB, Flanders JA, Erb HN, et al.: Nuclear medical bone imaging and targeted radiography for evaluation of skeletal neoplasms in 23 dogs, Vet Surg 18:454–458, 1989.
Sacornrattana O, Dervisis NG, McNiel EA: Abdominal ultrasonographic findings at diagnosis of osteosarcoma in dogs and association with treatment outcome, Vet Comp Oncol 11:199–207, 2013.
Wallace M, Selmic L, Withrow SJ: Diagnostic utility of abdominal ultrasonography for routine staging at diagnosis of skeletal OSA in dogs, J Am Anim Hosp Assoc 49:243–245, 2013.
Enneking WF, Spanier SS, Goodman MA: A system for the surgical staging of musculoskeletal sarcoma, Clin Orthop Relat Res 106–120, 1980.
Lamb CR, Berg J, Bengtson AE: Preoperative measurement of canine primary bone tumors, using radiography and bone scintigraphy, J Am Vet Med Assoc 196:1474–1478, 1990.
Leibman NF, Kuntz CA, Steyn PF, et al.: Accuracy of radiography, nuclear scintigraphy, and histopathology for determining the proximal extent of distal radius osteosarcoma in dogs, Vet Surg 30:240–245, 2001.
Davis GJ, Kapatkin AS, Craig LE, et al.: Comparison of radiography, computed tomography, and magnetic resonance imaging for evaluation of appendicular osteosarcoma in dogs, J Am Vet Med Assoc 220:1171–1176, 2002.
Schmidt AF, Nielen M, Klungel OH, et al.: Prognostic factors of early metastasis and mortality in dogs with appendicular osteosarcoma after receiving surgery; an individual patient data meta-analysis, Prev Vet Med 112:414–422, 2013.
Bergman PJ, MacEwen EG, Kurzman ID, et al.: Amputation and carboplatin for treatment of dogs with osteosarcoma; 48 cases (1991 to 1993), J Vet Intern Med 10:76–81, 1996.
Cho WH, Song WS, Jeon DG, et al.: Differential presentations, clinical courses, and survivals of osteosarcomas of the proximal humerus over other extremity locations, Ann Surg Oncol 17:702–708, 2010.
Kuntz CA, Asselin TL, Dernell WS, et al.: Limb salvage surgery for osteosarcoma of the proximal humerus; outcome in 17 dogs, Vet Surg 27:417–422, 1998.
Sottnik JL, Rao S, Lafferty MH, et al.: Association of blood monocyte and lymphocyte count and disease-free interval in dogs with osteosarcoma, J Vet Intern Med 24:1439–1444, 2010.
Boerman I, Selvarajah GT, Nielen M, et al.: Prognostic factors in canine appendicular osteosarcoma — a meta-analysis, BMC Vet Res 8:56, 2012.
Hammer AS, Weeren FR, Weisbrode SE, et al.: Prognostic factors in dogs with osteosarcomas of the flat or irregular bones, J Am Anim Hosp Assoc 31:321–326, 1995.
Kosovsky JK, Matthiesen DT, Marretta SM, et al.: Results of partial mandibulectomy for the treatment of oral tumors in 142 dogs, Vet Surg 20:397–401, 1991.
Schwarz PD, Withrow SJ, Curtis CR, et al.: Partial maxillary resection as a treatment for oral-cancer in 61 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 27:617–624, 1991.
Wallace J, Matthiesen DT, Patnaik AK: Hemimaxillectomy for the treatment of oral tumors in 69 dogs, Vet Surg 21:337–341, 1992.
Baines SJ, Lewis S, White RAS: Primary thoracic wall tumours of mesenchymal origin in dogs; a retrospective study of 46 cases, Vet Rec 150:335–339, 2002.
Matthiesen DT, Clark GN, Orsher RJ, et al.: En-bloc resection of primary rib tumors in 40 dogs, Vet Surg 21:201–204, 1992.
Montgomery RD, Henderson RA, Powers RD, et al.: Retrospective study of 26 primary tumors of the osseous thoracic wall in dogs, J Am Anim Hosp Assoc 29:68–72, 1993.
Pirkeyehrhart N, Withrow SJ, Straw RC, et al.: Primary rib tumors in 54 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 31:65–69, 1995.
Trout NJ, Pavletic MM, Kraus KH: Partial scapulectomy for management of sarcomas in 3 dogs and 2 cats, J Am Vet Med Assoc 207:585–587, 1995.
Norton C, Drenen CM, Emms SG: Subtotal scapulectomy as the treatment for scapular tumour in the dog; a report of six cases, Aust Vet J 84:364–366, 2006.
Dernell WS, Van Vechten BJ, Straw RC, et al.: Outcome following treatment of vertebral tumors in 20 dogs (1986-1995), J Am Anim Hosp Assoc 36:245–251, 2000.
Bray JP, Worley DR, Henderson RA, et al.: Hemipelvectomy; outcome in 84 dogs and 16 cats. A Veterinary Society of Surgical Oncology Retrospective Study, Vet Surg 43:27–37, 2014.
Turner H, Seguin B, Worley DR, et al.: Prognosis for dogs with stage III osteosarcoma following treatment with amputation and chemotherapy with and without metastasectomy, J Am Vet Med Assoc 251:1293–1305, 2017.
Garzotto CK, Berg J, Hoffmann WE, et al.: Prognostic significance of serum alkaline phosphatase activity in canine appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 14:587–592, 2000.
Ehrhart N, Dernell WS, Hoffmann WE, et al.: Prognostic importance of alkaline phosphatase activity in serum from dogs with appendicular osteosarcoma; 75 cases (1990-1996), J Am Vet Med Assoc 213:1002–1006, 1998.
Moore AS, Dernell WS, Ogilvie GK, et al.: Doxorubicin and BAY 12-9566 for the treatment of osteosarcoma in dogs; a randomized, double-blind, placebo-controlled study, J Vet Intern Med 21:783–790, 2007.
Liptak JM, Kamstock DA, Dernell WS, et al.: Oncologic outcome after curative-intent treatment in 39 dogs with primary chest wall tumors (1992-2005), Vet Surg 37:488–496, 2008.
Sternberg RA, Pondenis HC, Yang X, et al.: Association between absolute tumor burden and serum bone-specific alkaline phosphatase in canine appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 27:955–963, 2013.
Holmes KE, Thompson V, Piskun CM, et al.: Canine osteosarcoma cell lines from patients with differing serum alkaline phosphatase concentrations display no behavioural differences in vitro, Vet Comp Oncol 13:166–175, 2015.
McCleese JK, Bear MD, Kulp SK, et al.: Met interacts with EGFR and Ron in canine osteosarcoma, Vet Comp Oncol 11:124–139, 2013.
Mullins MN, Lana SE, Dernell WS, et al.: Cyclooxygenase-2 expression in canine appendicular osteosarcomas, J Vet Intern Med 18:859–865, 2004.
Shoeneman JK, Ehrhart 3rd EJ, Eickhoff JC, et al.: Expression and function of survivin in canine osteosarcoma, Cancer Res 72:249–259, 2012.
Thamm DH, O’Brien MG, Vail DM: Serum vascular endothelial growth factor concentrations and postsurgical outcome in dogs with osteosarcoma, Vet Comp Oncol 6:126–132, 2008.
Selvarajah GT, Bonestroo FA, Kirpensteijn J, et al.: Heat shock protein expression analysis in canine osteosarcoma reveals HSP60 as a potentially relevant therapeutic target, Cell Stress Chaperones 18:607–622, 2013.
Millanta F, Asproni P, Cancedda S, et al.: Immunohistochemical expression of COX-2, mPGES and EP2 receptor in normal and reactive canine bone and in canine osteosarcoma, J Comp Pathol 147:153–160, 2012.
Pang LY, Gatenby EL, Kamida A, et al.: Global gene expression analysis of canine osteosarcoma stem cells reveals a novel role for COX-2 in tumour initiation, PLoS One 9:e83144, 2014.
Selvarajah GT, Kirpensteijn J, van Wolferen ME, et al.: Gene expression profiling of canine osteosarcoma reveals genes associated with short and long survival times, Mol Cancer 8:72, 2009.
Scott MC, Sarver AL, Gavin KJ, et al.: Molecular subtypes of osteosarcoma identified by reducing tumor heterogeneity through an interspecies comparative approach, Bone 49:356–367, 2011.
Biller BJ, Elmslie RE, Burnett RC, et al.: Use of FoxP3 expression to identify regulatory T cells in healthy dogs and dogs with cancer, Vet Immunol Immunopathol 116:69–78, 2007.
O’Neill K, Guth A, Biller B, et al.: Changes in regulatory T cells in dogs with cancer and associations with tumor type, J Vet Intern Med 23:875–881, 2009.
Rissetto KC, Rindt H, Selting KA, et al.: Cloning and expression of canine CD25 for validation of an anti-human CD25 antibody to compare T regulatory lymphocytes in healthy dogs and dogs with osteosarcoma, Vet Immunol Immunopathol 135:137–145, 2010.
Biller BJ, Guth A, Burton JH, et al.: Decreased ratio of CD8+ T cells to regulatory T cells associated with decreased survival in dogs with osteosarcoma, J Vet Intern Med 24:1118–1123, 2010.
Tuohy JL, Lascelles BD, Griffith EH, et al.: Association of canine osteosarcoma and monocyte phenotype and chemotactic function, J Vet Intern Med 30:1167–1178, 2016.
Withers SS, Skorupski KA, York D, et al.: Association of macrophage and lymphocyte infiltration with outcome in canine osteosarcoma, Vet Comp Oncol, 2018. epub ahead of print.
Withrow SJ, Hirsch VM: Owner response to amputation of a pet’s leg, Vet Med Small Anim Clin 74(332):334, 1979.
Carberry CA, Harvey HJ: Owner satisfaction with limb amputation in dogs and cats, J Am Anim Hosp Assoc 23:227–232, 1987.
Berg J, Weinstein MJ, Schelling SH, et al.: Treatment of dogs with osteosarcoma by administration of cisplatin after amputation or limb-sparing surgery; 22 cases (1987-1990), J Am Vet Med Assoc 200:2005–2008, 1992.
LaRue SM, Withrow SJ, Powers BE, et al.: Limb-sparing treatment for osteosarcoma in dogs, J Am Vet Med Assoc 195:1734–1744, 1989.
Thrall DE, Withrow SJ, Powers BE, et al.: Radiotherapy prior to cortical allograft limb sparing in dogs with osteosarcoma; a dose response assay, Int J Radiat Oncol Biol Phys 18:1351–1357, 1990.
Vasseur P: Limb preservation in dogs with primary bone tumors, Vet Clin North Am Small Anim Pract 17:889–903, 1987.
Withrow SJ, Thrall DE, Straw RC, et al.: Intra-arterial cisplatin with or without radiation in limb-sparing for canine osteosarcoma, Cancer 71:2484–2490, 1993.
Straw RC, Withrow SJ: Limb-sparing surgery versus amputation for dogs with bone tumors, Vet Clin North Am Small Anim Pract 26:135–143, 1996.
O’Brien MG, Straw RC, Withrow SJ, et al.: Resection of pulmonary metastases in canine osteosarcoma; 36 cases (1983-1992), Vet Surg 22:105–109, 1993.
Selmic LE, Burton JH, Thamm DH, et al.: Comparison of carboplatin and doxorubicin-based chemotherapy protocols in 470 dogs after amputation for treatment of appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 28:554–563, 2014.
Liptak JM, Dernell WS, Straw RC, et al.: Intercalary bone grafts for joint and limb preservation in 17 dogs with high-grade malignant tumors of the diaphysis, Vet Surg 33:457–467, 2004.
Morello E, Buracco P, Martano M, et al.: Bone allografts and adjuvant cisplatin for the treatment of canine appendicular osteosarcoma in 18 dogs, J Small Anim Pract 42:61–66, 2001.
Tomford WW, Doppelt SH, Mankin HJ, et al.: 1983 bone bank procedures, Clin Orthop Relat Res R15–21, 1983.
Straw RC, Powers BE, Withrow SJ, et al.: The effect of intramedullary polymethylmethacrylate on healing of intercalary cortical allografts in a canine model, J Orthopaed Res 10:434–439, 1992.
Kirpensteijn J, Steinheimer D, Park RD, et al.: Comparison of cemented and non-cemented allografts in dogs with osteosarcoma, Vet Comp Orthopaed 11:178–184, 1998.
Liptak JM, Dernell WS, Ehrhart N, et al.: Cortical allograft and endoprosthesis for limb-sparing surgery in dogs with distal radial osteosarcoma; a prospective clinical comparison of two different limb-sparing techniques, Vet Surg 35:518–533, 2006.
Mitchell KE, Boston SE, Kung M, et al.: Outcomes of limb-sparing surgery using two generations of metal endoprosthesis in 45 dogs with distal radial osteosarcoma. A Veterinary Society of Surgical Oncology retrospective study, Vet Surg 45:36–43, 2016.
Bray JP, Kersley A, Downing W, et al.: Clinical outcomes of patient-specific porous titanium endoprostheses in dogs with tumors of the mandible, radius, or tibia; 12 cases (2013-2016), J Am Vet Med Assoc 251:566–579, 2017.
Fitzpatrick N, Guthrie JW: Hemipelvic and proximal femoral limb salvage endoprosthesis with tendon ongrowth in a dog, Vet Surg 47:963–969, 2018.
Degna MT, Ehrhart N, Feretti A, et al.: Bone transport osteogenesis for limb salvage — Following resection of primary bone tumors; experience with six cases (1991-1996), Vet Comp Orthopaed 13:18–22, 2000.
Ehrhart N: Longitudinal bone transport for treatment of primary bone tumors in dogs; technique description and outcome in 9 dogs, Vet Surg 34:24–34, 2005.
Jehn CT, Lewis DD, Farese JP, et al.: Transverse ulnar bone transport osteogenesis;a new technique for limb salvage for the treatment of distal radial osteosarcoma in dogs, Vet Surg 36:324–334, 2007.
Ehrhart N, Eurell JA, Tommasini M, et al.: Effect of cisplatin on bone transport osteogenesis in dogs, Am J Vet Res 63:703–711, 2002.
Rovesti GL, Bascucci M, Schmidt K, et al.: Limb sparing using a double bone-transport technique for treatment of a distal tibial osteosarcoma in a dog, Vet Surg 31:70–77, 2002.
Pooya HA, Seguin B, Mason DR, et al.: Biomechanical comparison of cortical radial graft versus ulnar transposition graft limb-sparing techniques for the distal radial site in dogs, Vet Surg 33:301–308, 2004.
Seguin B, Walsh PJ, Mason DR, et al.: Use of an ipsilateral vascularized ulnar transposition autograft for limb-sparing surgery of the distal radius in dogs; an anatomic and clinical study, Vet Surg 32:69–79, 2003.
Liptak JM, Dernell WS, Lascelles BD, et al.: Intraoperative extracorporeal irradiation for limb sparing in 13 dogs, Vet Surg 33:446–456, 2004.
Boston SE, Duerr F, Bacon N, et al.: Intraoperative radiation for limb sparing of the distal aspect of the radius without transcarpal plating in five dogs, Vet Surg 36:314–323, 2007.
Oya N, Kokubo M, Mizowaki T, et al.: Definitive intraoperative very high-dose radiotherapy for localized osteosarcoma in the extremities, Int J Radiat Oncol 51:87–93, 2001.
Sakayama K, Kidani T, Fujibuchi T, et al.: Definitive intraoperative radiotherapy for musculoskeletal sarcomas and malignant lymphoma in combination with surgical excision, Int J Clin Oncol 8:174–179, 2003.
Tsuboyama T, Toguchida J, Kotoura Y, et al.: Intra-operative radiation therapy for osteosarcoma in the extremities, Int Orthop 24:202–207, 2000.
Farese JP, Milner R, Thompson MS, et al.: Stereotactic radiosurgery for treatment of osteosarcomas involving the distal portions of the limbs in dogs, J Am Vet Med Assoc 225:1567–1572, 2004.
Kubicek L, Vanderhart D, Wirth K, et al.: Association between computed tomographic characteristics and fractures following stereotactic radiosurgery in dogs with appendicular osteosarcoma, Vet Radiol Ultrasound 57:321–330, 2016.
Curtis RC, Custis JT, Ehrhart NP, et al.: Combination therapy with zoledronic acid and parathyroid hormone improves bone architecture and strength following a clinically-relevant dose of stereotactic radiation therapy for the local treatment of canine osteosarcoma in athymic rats, PLoS One 11:e0158005, 2016.
Powers BE, Withrow SJ, Thrall DE, et al.: Percent tumor necrosis as a predictor of treatment response in canine osteosarcoma, Cancer 67:126–134, 1991.
Pagano C, Boudreaux B, Shiomitsu K: Safety and toxicity of an accelerated coarsely fractionated radiation protocol for treatment of appendicular osteosarcoma in 14 dogs; 10 Gy x 2 fractions, Vet Radiol Ultrasound 57:551–556, 2016.
Van Ginkel RJ, Hoekstra HJ, Meutstege FJ, et al.: Hyperthermic isolated regional perfusion with cisplatin in the local treatment of spontaneous canine osteosarcoma; assessment of short-term effects, J Surg Oncol 59:169–176, 1995.
Rossi CR, Pasquali S, Mocellin S, et al.: Long-term results of melphalan-based isolated limb perfusion with or without low-dose TNF for in-transit melanoma metastases, Ann Surg Oncol 17:3000–3007, 2010.
Deroose JP, Van Geel AN, Burger JWA, et al.: Isolated limb perfusion with TNF-alpha and melphalan for distal parts of the limb in soft tissue sarcoma patients, J Surg Oncol 105:563–569, 2012.
Zachos TA, Aiken SW, DiResta GR, et al.: Interstitial fluid pressure and blood flow in canine osteosarcoma and other tumors, Clin Orthop Relat Res 230–236, 2001.
Powers BE, Withrow SJ, Thrall DE, et al.: Percent tumor necrosis as a predictor of treatment response in canine osteosarcoma, Cancer 67:126–134, 1991.
Withrow SJ, Liptak JM, Straw RC, et al.: Biodegradable cisplatin polymer in limb-sparing surgery for canine osteosarcoma, Ann Surg Oncol 11:705–713, 2004.
Lascelles BDX, Dernell WS, Correa MT, et al.: Improved survival associated with postoperative wound infection in dogs treated with limb-salvage surgery for osteosarcoma, Ann Surg Oncol 12:1073–1083, 2005.
Culp WT, Olea-Popelka F, Sefton J, et al.: Evaluation of outcome and prognostic factors for dogs living greater than one year after diagnosis of osteosarcoma; 90 cases (1997–2008), J Am Vet Med Assoc 245:1141–1146, 2014.
Jeys LM, Grimer RJ, Carter SR, et al.: Post operative infection and increased survival in osteosarcoma patients; are they associated? Ann Surg Oncol 14:2887–2895, 2007.
Sottnik JL, U’Ren LW, Thamm DH, et al.: Chronic bacterial osteomyelitis suppression of tumor growth requires innate immune responses, Cancer Immunol Immunother 59:367–378, 2010.
Kramer A, Walsh PJ, Seguin B: Hemipelvectomy in dogs and cats; technique overview, variations, and description, Vet Surg 37:413–419, 2008.
Straw RC, Withrow SJ, Powers BE: Partial or total hemipelvectomy in the management of sarcomas in nine dogs and two cats, Vet Surg 21:183–188, 1992.
Bray JP: Hemipelvectomy; modified surgical technique and clinical experiences from a retrospective study, Vet Surg 43:19–26, 2014.
Chauvet AE, Hogge GS, Sandin JA, et al.: Vertebrectomy, bone allograft fusion, and antitumor vaccination for the treatment of vertebral fibrosarcoma in a dog, Vet Surg 28:480–488, 1999.
Nakata K, Miura H, Sakai H, et al.: Vertebral replacement for the treatment of vertebral osteosarcoma in a cat, J Vet Med Sci 79:999–1002, 2017.
Liptak JM, Dernell WS, Rizzo SA, et al.: Partial foot amputation in 11 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 41:47–55, 2005.
Fitzpatrick N, Smith TJ, Pendegrass CJ, et al.: Intraosseous transcutaneous amputation prosthesis (ITAP) for limb salvage in 4 dogs, Vet Surg 40:909–925, 2011.
Drygas KA, Taylor R, Sidebotham CG, et al.: Transcutaneous tibial implants; a surgical procedure for restoring ambulation after amputation of the distal aspect of the tibia in a dog, Vet Surg 37:322–327, 2008.
Kirpensteijn J, Straw RC, Pardo AD, et al.: Partial and total scapulectomy in the dog, J Am Anim Hosp Assoc 30:313–319, 1994.
Montinaro V, Boston SE, Buracco P, et al.: Clinical outcome of 42 dogs with scapular tumors treated by scapulectomy; a Veterinary Society of Surgical Oncology (VSSO) retrospective study (1995–2010), Vet Surg 42:943–950, 2013.
Straw RC, Withrow SJ, Powers BE: Primary osteosarcoma of the ulna in 12 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 27:323–326, 1991.
Duncan B, Lascelles X, Thomson MJ, et al.: Combined dorsolateral and intraoral approach for the resection of tumors of the maxilla in the dog, J Am Anim Hosp Assoc 39:294–305, 2003.
Fox LE, Geoghegan SL, Davis LH, et al.: Owner satisfaction with partial mandibulectomy or maxillectomy for treatment of oral tumors in 27 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 33:25–31, 1997.
White RAS: Mandibulectomy and maxillectomy in the dog – long-term survival in 100 cases, J Sm Anim Pract 32:69–74, 1991.
Withrow SJ, Holmberg DL: Mandibulectomy in the treatment of oral cancer, J Am Anim Hosp Assoc 19:273–286, 1983.
O’Brien MG, Withrow SJ, Straw RC, et al.: Total and partial orbitectomy for the treatment of periorbital tumors in 24 dogs and 6 cats; a retrospective study, Vet Surg 25:471–479, 1996.
Liptak JM, Dernell WS, Rizzo SA, et al.: Reconstruction of chest wall defects after rib tumor resection; a comparison of autogenous, prosthetic, and composite techniques in 44 dogs, Vet Surg 37:479–487, 2008.
Caceres E, Zaharia M, Valdivia S, et al.: Local control of osteogenic-sarcoma by radiation and chemotherapy, Int J Radiat Oncol 10:35–39, 1984.
Gaitanyanguas M: A study of the response of osteogenic-sarcoma and adjacent normal-tissues to radiation, Int J Radiat Oncol 7:593–595, 1981.
Machak GN, Tkachev SI, Solovyev YN, et al.: Neoadjuvant chemotherapy and local radiotherapy for high-grade osteosarcoma of the extremities, Mayo Clin Proc 78:147–155, 2003.
Walter CU, Dernell WS, LaRue SM, et al.: Curative-intent radiation therapy as a treatment modality for appendicular and axial osteosarcoma; a preliminary retrospective evaluation of 14 dogs with the disease, Vet Comp Oncol 3:1–7, 2005.
Chakraborty S, Das T, Sarma HD, et al.: Comparative studies of 177Lu-EDTMP and 177Lu-DOTMP as potential agents for palliative radiotherapy of bone metastasis, Appl Radiat Isot 66:1196–1205, 2008.
Zhou JJ, Gonzalez A, Lenox MW, et al.: Dosimetry of a 90Y-hydroxide liquid brachytherapy treatment approach to canine osteosarcoma using PET/CT, Appl Radiat Isot 97:193–200, 2015.
Khanna C, Prehn J, Hayden D, et al.: A randomized controlled trial of octreotide pamoate long-acting release and carboplatin versus carboplatin alone in dogs with naturally occurring osteosarcoma; evaluation of insulin-like growth factor suppression and chemotherapy, Clin Cancer Res 8:2406–2412, 2002.
Vail DM, Kurzman ID, Glawe PC, et al.: STEALTH liposome-encapsulated cisplatin (SPI-77) versus carboplatin as adjuvant therapy for spontaneously arising osteosarcoma (OSA) in the dog; a randomized multicenter clinical trial, Cancer Chemoth Pharmacol 50:131–136, 2002.
Philips B, Powers BE, Dernell WS, et al.: Use of single-agent carboplatin as adjuvant or neoadjuvant therapy in conjunction with amputation for appendicular osteosarcoma in dogs, J Am Anim Hosp Assoc 45:33–38, 2009.
Saam DE, Liptak JM, Stalker MJ, et al.: Predictors of outcome in dogs treated with adjuvant carboplatin for appendicular osteosarcoma; 65 cases (1996–2006), J Am Vet Med Assoc 238:195–206, 2011.
Berg J, Weinstein MJ, Springfield DS, et al.: Results of surgery and doxorubicin chemotherapy in dogs with osteosarcoma, J Am Vet Med Assoc 206:1555–1560, 1995.
Chun R, Garrett LD, Henry C, et al.: Toxicity and efficacy of cisplatin and doxorubicin combination chemotherapy for the treatment of canine osteosarcoma, J Am Anim Hosp Assoc 41:382–387, 2005.
Chun R, Kurzman ID, Couto CG, et al.: Cisplatin and doxorubicin combination chemotherapy for the treatment of canine osteosarcoma; a pilot study, J Vet Intern Med 14:495–498, 2000.
Bailey D, Erb H, Williams L, et al.: Carboplatin and doxorubicin combination chemotherapy for the treatment of appendicular osteosarcoma in the dog, J Vet Intern Med 17:199–205, 2003.
Kent MS, Strom A, London CA, et al.: Alternating carboplatin and doxorubicin as adjunctive chemotherapy to amputation or limb-sparing surgery in the treatment of appendicular osteosarcoma in dogs, J Vet Intern Med 18:540–544, 2004.
Bacon NJ, Ehrhart NP, Dernell WS, et al.: Use of alternating administration of carboplatin and doxorubicin in dogs with microscopic metastases after amputation for appendicular osteosarcoma; 50 cases (1999–2006), J Am Vet Med Assoc 232:1504–1510, 2008.
Lane A, Black M, Wyatt K: Toxicity and efficacy of a novel doxorubicin and carboplatin chemotherapy protocol for the treatment of canine appendicular osteosarcoma following limb amputation, Aust Vet J 90:69–74, 2012.
Frimberger AE, Chan CM, Moore AS: Canine osteosarcoma treated by post-amputation sequential accelerated doxorubicin and carboplatin chemotherapy; 38 cases, J Am Anim Hosp Assoc 52:149–156, 2016.
Skorupski KA, Uhl JM, Szivek A, et al.: Carboplatin versus alternating carboplatin and doxorubicin for the adjuvant treatment of canine appendicular osteosarcoma; a randomized, phase III trial, Vet Comp Oncol 14:81–87, 2016.
Bracha S, Walshaw R, Danton T, et al.: Evaluation of toxicities from combined metronomic and maximal-tolerated dose chemotherapy in dogs with osteosarcoma, J Small Anim Pract 55:369–374, 2014.
Matsuyama A, Schott CR, Wood GA, et al.: Evaluation of metronomic cyclophosphamide chemotherapy as maintenance treatment for dogs with appendicular osteosarcoma following limb amputation and carboplatin chemotherapy, J Am Vet Med Assoc 252:1377–1383, 2018.
Kurzman ID, Shi F, Vail DM, et al.: In vitro and in vivo enhancement of canine pulmonary alveolar macrophage cytotoxic activity against canine osteosarcoma cells, Cancer Biother Radiopharm 14:121–128, 1999.
MacEwen EG, Kurzman ID, Rosenthal RC, et al.: Therapy for osteosarcoma in dogs with intravenous injection of liposome-encapsulated muramyl tripeptide, J Natl Cancer Inst 81:935–938, 1989.
Kurzman ID, MacEwen EG, Rosenthal RC, et al.: Adjuvant therapy for osteosarcoma in dogs; results of randomized clinical trials using combined liposome-encapsulated muramyl tripeptide and cisplatin, Clin Cancer Res 1:1595–1601, 1995.
Modiano JF, Bellgrau D, Cutter GR, et al.: Inflammation, apoptosis, and necrosis induced by neoadjuvant Fas ligand gene therapy improves survival of dogs with spontaneous bone cancer, Mol Ther 20:2234–2243, 2012.
Mason NJ, Gnanandarajah JS, Engiles JB, et al.: Immunotherapy with a HER2-targeting listeria induces HER2-specific immunity and demonstrates potential therapeutic effects in a phase I trial in canine osteosarcoma, Clin Cancer Res 22:4380–4390, 2016.
Polednak AP: Human biology and epidemiology of childhood bone cancers; a review, Hum Biol 57:1–26, 1985.
London CA, Gardner HL, Mathie T, et al.: Impact of toceranib/piroxicam/cyclophosphamide maintenance therapy on outcome of dogs with appendicular osteosarcoma following amputation and carboplatin chemotherapy; a multi-institutional study, PLoS One 10:e0124889, 2015.
Alvarez FJ, Kisseberth W, Hosoya K, et al.: Postoperative adjuvant combination therapy with doxorubicin and noncytotoxic suramin in dogs with appendicular osteosarcoma, J Am Anim Hosp Assoc 50:12–18, 2014.
Downey RJ: Surgical treatment of pulmonary metastases, Surg Oncol Clin North Amer 8:341, 1999.
Liptak JM, Monnet E, Dernell WS, et al.: Pulmonary metastatectomy in the management of four dogs with hypertrophic osteopathy, Vet Comp Oncol 2:1–12, 2004.
Ogilvie GK, Straw RC, Jameson VJ, et al.: Evaluation of single-agent chemotherapy for treatment of clinically evident osteosarcoma metastases in dogs; 45 cases (1987–1991uo), J Am Vet Med Assoc 202:304–306, 1993.
Poirier VJ, Hershey AE, Burgess KE, et al.: Efficacy and toxicity of paclitaxel (Taxol) for the treatment of canine malignant tumors, J Vet Intern Med 18:219–222, 2004.
London CA, Hannah AL, Zadovoskaya R, et al.: Phase I dose-escalating study of SU11654, a small molecule receptor tyrosine kinase inhibitor, in dogs with spontaneous malignancies, Clin Cancer Res 9:2755–2768, 2003.
London C, Mathie T, Stingle N, et al.: Preliminary evidence for biologic activity of toceranib phosphate (Palladia®) in solid tumours, Vet Comp Oncol 10:194–205, 2012.
Laver T, London CA, Vail DM, et al.: Prospective evaluation of toceranib phosphate in metastatic canine osteosarcoma, Vet Comp Oncol 16:E23–E29, 2018.
Kim C, Matsuyama A, Mutsaers AJ, et al.: Retrospective evaluation of toceranib (Palladia) treatment for canine metastatic appendicular osteosarcoma, Can Vet J 58:1059–1064, 2017.
Wittenburg LA, Ptitsyn AA, Thamm DH: A systems biology approach to identify molecular pathways altered by HDAC inhibition in osteosarcoma, J Cell Biochem 113:773–783, 2012.
Wittenburg LA, Gustafson DL, Thamm DH: Phase I pharmacokinetic and pharmacodynamic evaluation of combined valproic acid/doxorubicin treatment in dogs with spontaneous cancer, Clin Cancer Res 16:4832–4842, 2010.
Hershey AE, Kurzman ID, Forrest LJ, et al.: Inhalation chemotherapy for macroscopic primary or metastatic lung tumors; proof of principle using dogs with spontaneously occurring tumors as a model, Clin Cancer Res 5:2653–2659, 1999.
Rodriguez CO, Crabbs TA, Wilson DW, et al.: Aerosol gemcitabine; preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs, J Aerosol Med Pulm D 23:197–206, 2010.
Koshkina NV, Kleinerman ES: Aerosol gemcitabine inhibits the growth of primary osteosarcoma and osteosarcoma lung metastases, Int J Cancer 116:458–463, 2005.
Khanna C, Anderson PM, Hasz DE, et al.: Interleukin-2 liposome inhalation therapy is safe and effective for dogs with spontaneous pulmonary metastases, Cancer 79:1409–1421, 1997.
Dow S, Elmslie R, Kurzman I, et al.: Phase I study of liposome-DNA complexes encoding the interleukin-2 gene in dogs with osteosarcoma lung metastases, Hum Gene Ther 16:937–946, 2005.
Thamm DH, Kurzman ID, King I, et al.: Systemic administration of an attenuated, tumor-targeting Salmonella typhimurium to dogs with spontaneous neoplasia; phase I evaluation, Clin Cancer Res 11:4827–4834, 2005.
Goblirsch M, Mathews W, Lynch C, et al.: Radiation treatment decreases bone cancer pain, osteolysis and tumor size, Radiat Res 161:228–234, 2004.
Withrow SJ, Powers BE, Straw RC, et al.: Tumor necrosis following radiation therapy and/or chemotherapy for canine osteosarcoma, Chir Organi Mov 75:29–31, 1990.
Vakaet LA, Boterberg T: Pain control by ionizing radiation of bone metastasis, Int J Dev Biol 48:599–606, 2004.
Green EM, Adams WM, Forrest LJ: Four fraction palliative radiotherapy for osteosarcoma in 24 dogs, J Am Anim Hosp Assoc 38:445–451, 2002.
Knapp-Hoch HM, Fidel JL, Sellon RK, et al.: An expedited palliative radiation protocol for lytic or proliferative lesions of appendicular bone in dogs, J Am Anim Hosp Assoc 45:24–32, 2009.
Mueller F, Poirier V, Melzer K, et al.: Palliative radiotherapy with electrons of appendicular osteosarcoma in 54 dogs, Vivo 19:713–716, 2005.
Ramirez 3rd O, Dodge RK, Page RL, et al.: Palliative radiotherapy of appendicular osteosarcoma in 95 dogs, Vet Radiol Ultrasound 40:517–522, 1999.
McEntee MC, Page RL, Novotney CA, et al.: Palliative radiotherapy for canine appendicular osteosarcoma, Vet Radiol Ultrasound 34:367–370, 1993.
Oblak ML, Boston SE, Higginson G, et al.: The impact of pamidronate and chemotherapy on survival times in dogs with appendicular primary bone tumors treated with palliative radiation therapy, Vet Surg 41:430–435, 2012.
Holmes RA: [153Sm]EDTMP; a potential therapy for bone cancer pain, Semin Nucl Med 22:41–45, 1992.
Serafini AN: Samarium Sm-153 lexidronam for the palliation of bone pain associated with metastases, Cancer 88:2934–2939, 2000.
Aas M, Moe L, Gamlem H, et al.: Internal radionuclide therapy of primary osteosarcoma in dogs, using 153Sm-ethylene-diamino-tetramethylene-phosphonate (EDTMP), Clin Cancer Res 5:3148s–3152s, 1999.
Barnard SM, Zuber RM, Moore AS: Samarium Sm 153 lexidronam for the palliative treatment of dogs with primary bone tumors; 35 cases (1999–2005), J Am Vet Med Assoc 230:1877–1881, 2007.
Lattimer JC, Corwin Jr LA, Stapleton J, et al.: Clinical and clinicopathologic response of canine bone tumor patients to treatment with samarium-153-EDTMP, J Nucl Med 31:1316–1325, 1990.
Milner RJ, Dormehl I, Louw WK, et al.: Targeted radiotherapy with Sm-153-EDTMP in nine cases of canine primary bone tumours, J S Afr Vet Assoc 69:12–17, 1998.
Vancil JM, Henry CJ, Milner RJ, et al.: Use of samarium Sm 153 lexidronam for the treatment of dogs with primary tumors of the skull; 20 cases (1986–2006), J Am Vet Med Assoc 240:1310–1315, 2012.
Bryan JN, Bommarito D, Kim DY, et al.: Comparison of systemic toxicities of 177Lu-DOTMP and 153Sm-EDTMP administered intravenously at equivalent skeletal doses to normal dogs, J Nucl Med Technol 37:45–52, 2009.
Chakraborty S, Balogh L, Das T, et al.: Evaluation of 177Lu-EDTMP in dogs with spontaneous tumor involving bone; pharmacokinetics, dosimetry and therapeutic efficacy, Curr Radiopharm 9:64–70, 2016.
Thapa P, Nikam D, Das T, et al.: Clinical efficacy and safety comparison of 177Lu-EDTMP with 153Sm-EDTMP on an equidose basis in patients with painful skeletal metastases, J Nucl Med 56:1513–1519, 2015.
Lipton A: New therapeutic agents for the treatment of bone diseases, Expert Opin Biol Ther 5:817–832, 2005.
Coleman RE: Therapeutic use of bisphosphonates in oncology, Brit Med J 309:1233, 1994.
Coleman RE, McCloskey EV: Bisphosphonates in oncology, Bone 49:71–76, 2011.
Carano A, Teitelbaum SL, Konsek JD, et al.: Bisphosphonates directly inhibit the bone resorption activity of isolated avian osteoclasts in vitro, J Clin Invest 85:456–461, 1990.
Hughes DE, Wright KR, Uy HL, et al.: Bisphosphonates promote apoptosis in murine osteoclasts in vitro and in vivo, J Bone Miner Res 10:1478–1487, 1995.
Luckman SP, Hughes DE, Coxon FP, et al.: Nitrogen-containing bisphosphonates inhibit the mevalonate pathway and prevent posttranslational prenylation of GTP-binding proteins, including Ras, J Bone Miner Res 13:581–589, 1998.
Tomlin JL, Sturgeon C, Pead MJ, et al.: Use of the bisphosphonate drug alendronate for palliative management of osteosarcoma in two dogs, Vet Rec 147:129–132, 2000.
Fan TM, de Lorimier LP, Charney SC, et al.: Evaluation of intravenous pamidronate administration in 33 cancer-bearing dogs with primary or secondary bone involvement, J Vet Intern Med 19:74–80, 2005.
Fan TM, de Lorimier LP, O’Dell-Anderson K, et al.: Single-agent pamidronate for palliative therapy of canine appendicular osteosarcoma bone pain, J Vet Intern Med 21:431–439, 2007.
Tuohy J, Haussler K, Adrian C, et al.: Interim analysis of randomized placebo-controlled clinical trial of radiation therapy +/- pamidronate for palliative treatment of canine appendicular osteosarcoma, Vete Comp Oncol 9:e1–e49, 2011.
Fan TM, Charney SC, de Lorimier LP, et al.: Double-blind placebo-controlled trial of adjuvant pamidronate with palliative radiotherapy and intravenous doxorubicin for canine appendicular osteosarcoma bone pain, J Vet Intern Med 23:152–160, 2009.
Spugnini EP, Vincenzi B, Caruso G, et al.: Zoledronic acid for the treatment of appendicular osteosarcoma in a dog, J Small Anim Pract 50:44–46, 2009.
Fan TM, de Lorimier LP, Garrett LD, et al.: The bone biologic effects of zoledronate in healthy dogs and dogs with malignant osteolysis, J Vet Intern Med 22:380–387, 2008.
Lundberg AP, Roady PJ, Somrak AJ, et al.: Zoledronate-associated osteonecrosis of the jaw in a dog with appendicular osteosarcoma, J Vet Intern Med 30:1235–1240, 2016.
Vail DM, MacEwen EG: Spontaneously occurring tumors of companion animals as models for human cancer, Cancer Invest 18:781–792, 2000.
Withrow SJ, Wilkins RM: Cross talk from pets to people; translational osteosarcoma treatments, ILAR J 51:208–213, 2010.
Rowell JL, McCarthy DO, Alvarez CE: Dog models of naturally occurring cancer, Trends Mol Med 17:380–388, 2011.
Ayerza MA, Farfalli GL, Aponte-Tinao L, et al.: Does increased rate of limb-sparing surgery affect survival in osteosarcoma? Clin Orthop Relat Res 468:2854–2859, 2010.
Mankin HJ, Hornicek FI, Rosenberg AE, et al.: Survival data for 648 patients with osteosarcoma treated at one institution, Clin Orthop Relat Res 286–291, 2004.
Marina NM, Smeland S, Bielack SS, et al.: Comparison of MAPIE versus MAP in patients with a poor response to preoperative chemotherapy for newly diagnosed high-grade osteosarcoma (EURAMOS-1); an open-label, international, randomised controlled trial, Lancet Oncol 17:1396–1408, 2016.